ROSE平台的构建思路与工作误区课件.ppt

.. .. .. .. .. .. .. 介入呼吸病学快速现场评价(ROSE)系统(玫瑰系统)的构建 冯 靖 天津医科大学总医院 呼吸与危重症科 主任医师 教授 博士生导师 美国杜克大学医学中心 博士后 美国国立卫生研究院 博士后 客座教授 近年来,介入呼吸病学快速发展,成为现代呼吸病学最活跃的 分支之一.呼吸系统肿瘤性疾病需借助介入方式诊断,更需要借助介入方式治疗;实际上,呼吸系统感染性疾病的诊断和治 疗对介入手段的要求则更加直接与迫切.在介入诊疗的实际操作中,尤其是介入诊断过程中,快速现场评价(ROSE-玫瑰)发挥了至关重要的作用,俨然成为介入操作的天然伴侣. * 笔者将ROSE的概念加以放大,扩充为玫瑰系统.玫瑰系统可做如下定义: 以快速现场细胞学评价(ROSCE)为核心,综合各种杂交技术,从而提高介入诊断的敏感性、特异性和效率.具体地,以ROSCE实时地伴随介入操作,并据此调整介入操作的方式和手段;经ROSCE进行评价与质量控制以后,取材以合适的渠道进入不同的跟进评价环节,并将部分取材送交平行科室与辅助科室,如检验科与病理科,最终完成介入诊疗操作.而在这一系列方式、手段、渠道、环节中要混杂应用各种杂交技术. * 各单位可根据自己实际情况构建自己的玫瑰系统.在天津医科大学总医院呼吸与危重症科,玫瑰系统由4个快速现场平台和7个跟进评价环节组成. 这4个快速现场平台包括: 1. 通用平光 ROSCE平台; 2. 倒置相差荧光ROSCE平台; 3. 沉降与离心液基 薄层ROSCE平台; 4. 快速现场流式细胞术平台. 7个跟进评价环节包括: 1. ARMS PCR; 2. 染色体荧光原位杂交(FISH); 3. 跟进特殊染色(特染); 4. 跟进流式细胞术; 5. Buffy Coat ROSCE; 6. 细菌与细胞培养;7. 免疫微磁珠特殊细胞分离. * 现场平台1-通用平光ROSCE平台 * 现场平台2-倒置相差荧光ROSCE平台 * 现场平台3-沉降与离心液基薄层ROSCE平台 * 现场平台4-快速现场流式细胞术平台 * 跟进环节1-ARMS PCR 武汉友芝友科技ARMS PCR技术 * 跟进环节2-染色体荧光原位杂交(FISH) * 跟进环节3-特殊染色(特染) * 跟进环节4-跟进流式细胞术 * 跟进环节5-Buffy Coat ROSCE * 跟进环节6-细菌与细胞培养 * 跟进环节7-免疫微磁珠特殊细胞分离 * 在整个玫瑰系统中,通用平光ROSCE平台是其他快速现场平台和所有跟进环节的基础,也是所取得标本的枢纽.该平台包括: 1. 科研级平光显微镜; 2. 广视野科研级高数值孔径免油干物镜镜头(×10、×40、×100); 3. 广视野科研级目镜镜头(×10、×15); 4. 必要时显微镜镜身加装内部中央放大变倍系统; 5. 高分辨率CCD(所谓高超视网膜)图文成像照相系统. * 通用平光ROSCE平台 * 玫瑰系统工作者应有极高的临床素养,要全身心有热情地投入,要有庞杂的交叉学科知识,熟悉现代呼吸病学、介入呼吸病 学、病理学、细胞学、临床微生物学、肿瘤学等多学科综合知 识.要根据平光ROSCE平台下细胞形态学特点,运用多学科知 识,结合病史、查体、影像学、实验室检查等等综合分析,最终做出正确判断与初步诊断.再将所取得的标本以合适的渠道进入不同跟进环节.所以玫瑰系统工作是一个诊断流程而非检 验流程,这就决定了玫瑰系统必须由临床医生为主导. * 玫瑰系统工作的主要技术理念和原则: 1. 玫瑰系统能做什么固然重要,更重要的是玫瑰系统后面要 做什么.例如,对于肿瘤性疾病,只有经过平光ROSCE平台初 步诊断与质量控制以后,才能输入下一个有效环节,如电子显 微镜、免疫组织/细胞化学、染色体荧光原位杂交(FISH)、ARMS PCR、测序等等;而对于感染性疾病,也只有经过ROSCE初步诊断与质量控制后,方能进行病理学检查和各种特染、微生物学检查和相关特染、肺活检标本切割滚涂、肺活检标本研 磨培养、肺活检标本直接增菌操作、防污染毛刷直接涂碟、基因测序等等. * 2. 玫瑰系统虽可提供部分微生物病原形态学和中性粒细胞、 巨噬细胞或淋巴细胞吞噬细菌等信息,但看到细菌或真菌本身,不是最重要的!最重要的是,它提供细胞分类、计数及其比例等清晰的细胞学背景,代表了机体对微生物如何反应 的几乎全部信息,经验丰富的玫瑰工作者可据此进行病情的全面分析、预判甚至初步诊断.这一点与传统的经验性治疗理念有着本质的不同. * 3. 就像血液科医师要会看血片一样,呼吸科医师总要会 看肺