响应面法优化广枣总黄酮的超声提取工艺研究.doc

响应面法优化广枣总黄酮的超声提取工艺研究 采用响应面法超声提取广枣 ［Choerospondias axillaris (Roxb.) Burtt et H川］中总黄 酮，在单因素试验基础上，利用Design-Expert 8.0、5.0 软件设计响应面试验，研究乙醇溶液体积分数、液料 比、超声时间和超声温度对总黄酮提取率的影响。结 果表明，广枣中总黄酮的最佳超声提取工艺参数乙醇 溶液体积分数为62%，超声提取时间为55 min，液料 比为35.00 : 1 (V : m),在此试验条件下广枣总黄酮 平均提取率为3.472%。 关键词：广枣［Choerospondias axNlaris (Roxb.) Burtt et Hill］；总黄酮;超声提取；响应面法 S665.1 A : 0439-8114 (2015) 09-2210-04 广枣为漆树科植物南酸枣［Choerospondias axillaris (Roxb.) Burtt et Hill］的干燥成熟果实，又名 五眼果、酸枣、山枣子等，是蒙古族常用药材［1］。广 枣性味甘、酸，具有行气活血、养心安神的功能，用 于气滞血瘀、胸痹作痛、心悸气短、心神不安等病症 的治疗。广枣中的化学成分包括黄酮、有机酸、甾醇、 香豆素、挥发油、酚酸类、多糖、氨基酸及多种无机 元素等［2］。广枣中的总黄酮是其有效成分，具有多种 生理活性作用。目前，广枣中黄酮类化合物的提取方 法主要有醇提热回流法［3-5］、醇提渗漉法［6］及水煮提 取法［7］等，且大多采用正交设计法研究其提取工艺。 本研究在单因素试验的基础上，使用响应面分析法［8, 9］优化广枣中总黄酮的提取工艺，旨在为广枣的进一 步研究开发提供科学依据和参考。 1材料与方法 1.1材料、试剂与仪器 广枣药材（毫州市中药饮片厂，批号130426）， 经赣南医学院药学院中药鉴定教研室程齐来教授鉴定。 芦丁标准品（A0103,含量彡98%，北京恒元启天化工 技术研宄院）；无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝均为分析 纯。 PELambda35UV/VIS型紫外可见分光光度计（美 国珀金埃尔默公司）；FW135型手提中药粉碎机（天 津市泰斯特仪器有限公司）；H2002型分析天平（上 海精天电子仪器公司）;EYELAN-1001型旋转蒸发仪（日 本东京理化器械）；EYELAA-1000S型水式真空泵（上 海爱明仪器有限公司）；202A-2型电热干燥箱（上海 阳光试验仪器有限公司）；KQ3200DB型数控超声波清 洗器（昆山市超声仪器有限公司）。 1.2试验方法 1.2.1标准曲线的绘制精确称取11.15 mg芦丁标 准品，用60%乙醇溶液溶解，定容于100 mL容量瓶中， 摇匀，得到111.5 mg八的芦丁标准溶液。精确量取芦 丁标准溶液 0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL,分别置于 10.0 mL容量瓶中。依次分别加入60%乙醇溶液稀释至 5.0 mL，加入5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀，静置5 min 再加入0.3 mL的10%硝酸铝溶液，迅速摇匀，静置6 min,最后加入4 mL4%氢氧化钠溶液，混匀，用60% 乙醇溶液稀释至刻度，充分摇匀。放置15 min后，以 不加芦丁的试剂作空白对照，测定波长为509 nm时的 吸光度，得到吸光度（Y）与芦丁溶液浓度（X）的回 归方程为 Y=0.011 3X-0.0017, R2=0.999 7o 1.2.2广枣总黄酮的超声提取将广枣50 °C恒温 烘干后粉碎过40目筛，称取0.5 g，加入60%乙醇溶 液15 mL，浸泡15 min后，在70 °C下超声50min， 抽滤。待样品冷却到室温后再重复处理1次。合并滤 液，用旋转蒸发仪回收溶剂，浓缩后用60%乙醇溶液 定容于50 mL容量瓶中备用。 1.2.3总黄酮含量的测定吸取ImL滤液于10mL 容量瓶中，按标准曲线的测定方法测定其吸光度，计 算总黄酮含量和提取率。 1.2.4单因素试验①乙醇溶液体积分数。分析不 同乙醇体积分数（40%、50%> 60%、70%、80%）对 广枣总黄酮提取率的影响；②液料比。分析不同液料 比（10 : 1、15 : 1、20 : 1、25 : 1、30 : 1、35 : 1、 40 ： 1, mL ： g）对广枣总黄酮提取率的影响；③超声 时间。分析不同超声时间（20、30、40、50、60、70 min）对广枣总黄酮提取率的影响；④超声温度。分析 不同超声温度（40、45、50、60、70 °C）对广枣总黄 酮提取率的影响。 1.2.5响应面试验设计根据Box-Behnken中心组 合试验设计原理，综合单因素试验结果，选取乙醇溶 液体积分数（A）、超声时间（B）、料液比（C） 3个对 总黄酮提取率影响