生物技术专业试验-吉林大学国家级生物试验教学示范.DOC

生物技术专业（343014）实验教学大纲 01．教学单位名称：生命科学学院 02．实验中心名称：吉林大学国家级生物实验教学示范中心 03．课程名称：生物技术专业实验 04．课程代码：343014 05．课程类别：专业课 06．课程性质：必修 07．课程学时：48 08．课程学分：1.5 09．面向专业：生物技术 10．实验课程的教学任务、要求和教学目的 10.1 教学任务： 生物技术专业实验是继植物生物学实验、生理学实验、微生物学实验、遗传学实验、细胞生物学实验、生物化学实验Ⅰ、生物化学实验Ⅱ、分子生物学实验、免疫学实验之后为生物技术、理科实验班专业本科高年级学生开设的一门综合性较强的实验，是专业课程，在整个实验教学中起着承上启下的作用。 10.2 教学要求： 与之前开设的实验不同，生物技术专业实验所涉及的生物知识面广，具有较强的综合性与技术性。它在培养学生的独立工作能力、学习如何用实验的方法与技能、配合理论课程掌握近代生物技术主要领域中的新概念方面起到重要的作用。在教学过程中要注意培养学生对基础知识的综合运用能力，将之前所学的各门独立的知识、理论体系串联起来，做到融会贯通，正确认识到新生物概念的产生、形成和发展过程。 10.3 教学目的： 通过生物技术专业实验，强化实验技能训练，加强实验技术与实验方法的科学综合，实验内容与科研、生产和社会应用实践密切联系，使学生全面掌握生物技术高层次实验技术，培养学生理论联系实际、实事求是的学风，提高分析问题、解决问题的能力，掌握基本的专业实验技术和操作技能，激发学生的创新意识，培养学生的创新精神、创新能力和科学思维。同时与毕业设计和后续的研究生教育接轨。增强学生的专业实验技能，提高学生的专业知识。 11．学生应掌握的实验技术及实验能力 通过本实验课程，学生应掌握核酸提取技术、PCR扩增技术、基因工程菌的构建技术、工程菌种保存技术、发酵培养技术、诱导表达技术、菌体超声破碎技术、镍柱亲和层析技术、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术、蛋白质印迹（湿法转膜）技术、酶固定化技术等。 12．开设实验项目 重组人白介素-18亲和层析、免疫印迹(Western Blot)鉴定项目，主要实验内容包括：将分子生物学实验构建的保存于-80℃ 重组人白介素-18诱导表达与检测项目，主要实验内容包括：将外源基因克隆在含有lacI启动子的pET-32表达载体中，利用E.coli作为宿主进行表达；先让宿主菌生长，lacI产生的阻遏蛋白与lacI操纵基因结合，从而不能进行外源基因的转录与表达，此时宿主菌正常生长；然后向培养基中加入lacI操纵子的诱导物IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖 )，阻遏蛋白不能与操纵基因结合，则DNA外源基因大量转录并高效表达。 基因工程药物人干扰素α-2b工程菌的制备项目，主要实验内容包括从GeneBank中查询人干扰素α-2b的氨基酸序列，根据其一级序列信息，选择宿主偏爱的密码子，编码目的基因序列，在目的基因上下游添加相关元件后拆分成单链寡核苷酸，通过化学方法合成，合成后的单链寡核苷酸利用PCR方法拼接成双链目的基因，并将其转化到合适的载体上，转化到合适的宿主中，构建成工程菌。 D-氨基酰化酶的固定化及其生物学性质研究项目，主要实验内容包括利用共价、经典吸附、交联、网格固定等方法将D-氨基酰化酶酶固定在介质的一定空间内，同时考察细胞和酶固定化后的生物学特性。 12.5含D-氨基酰化酶基因工程菌细胞的固定化及应用工艺研究项目，主要实验内容包括含D-氨基酰化酶的基因工程菌E.coil BL21(DE3) 细胞利用共价、经典吸附、交联、网格固定等方法固定在介质的一定空间内，同时考察细胞固定化后的生物学特性，建立可反复使用的固定化细胞应用工艺。 蛋白质组学在神经生长因子（NGF）促PC12细胞分化机理研究中的应用项目，主要实验内容包括PC12细胞的培养，神经生长因子（NGF）及磷酸缓冲液对细胞的孵育处理，PC12细胞分化效果对比观察及总蛋白提取，二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，Discover Studio软件分析差异斑点，利用小型切胶系统分离差异斑点，利用蛋白纯化系统纯化差异表达的蛋白，最后利用蛋白质谱，对差异表达蛋白进行定性分析，从而深入探讨NGF促PC12细胞分化机理。 培养学生查阅资料和撰写论文的能力；学会查阅、归纳、整理与相关的技术资料，并写成具体的实验设计方案。 镍柱亲和层析，培养学生掌握镍柱亲和层析技术的实验操作。 蛋白免疫印迹，培养学生掌握蛋白免疫印迹的实验操作。 开设实验项目一览表 实验项目编号 实验项目名称 实验类型 实验性质 实验学时 每组人数 首次开出年月重组人白介素-18亲和层析、免疫印迹(Western Blot)鉴定 综合性 必做 30 2 200905