善胃Ⅱ号方对大鼠胃癌前病变的抑制作用及其机制研究..doc

善胃II号方对大鼠胃癌前病变的抑制作用及其机制研究 ：唐丽明，高世全，施伟东，李东华，袁红霞 】目的研究善胃n号方对胃癌前病变模型大鼠 胃黏膜P16、rasP21蛋白的影响及其对胃黏膜病理组织学改 变的影响。方法制备胃癌前病变大鼠模型。将130只雄性 Wistar大鼠随机均分为4组，即空白组、模型组、西药组、 中药组。除空白组外，其余各组大鼠制作胃癌前病变模型。 造模30周后，空白组和模型组每日给予生理盐水灌胃，中 药组和西药组大鼠分别给予善胃II号方或维酶素灌胃6周， 处死大鼠并取材。光镜下观察各组大鼠胃黏膜病理组织学改 变；免疫组化法检测胃黏膜组织P16、rasP21蛋白表达水平。 结果胃癌前病变模型大鼠胃黏膜P16表迗显著降低、rasP21 蛋白表达显著增高；中药组与模型组比较，P16显著增高； 西药组与中药组比较，P16蛋白表迗差异有统计学意义， rasP2 1蛋白表迗差异无统计学意义。结论善胃II号方可阻 断胃癌前病变模型大鼠胃黏膜的腺体进一步肠化与异型增 生。升高P1 6蛋白的表迗、降低rasP21蛋白表迗可能是其 有效防治胃癌前病变的机制之一。 关键词】善胃II号方；胃癌前病变；P16; rasP21 胃黏膜细胞癌变过程中存在多基因的变化及积累，是一 个多基因多步骤渐进的过程。与其它恶性肿瘤一样，胃黏膜 上皮细胞的癌变是一个渐进过程，常经历多年的持续胃癌癌 前病变阶段，因此如何有效治疗和逆转胃癌前病变，是预防 胃癌发生的重要途径。善胃系列方剂以中医理论为基础，依 照中医方剂配伍的基本原则，针对胃癌前病变的主要病机， 分别以活血解毒、养阴清热和益气养阴为主法，针对疾病不 同的演变过程及证候情况施以不同的治疗法则，在临床实践 中已取得了良好效果［1?4］。本研究旨在利用大鼠胃癌前 病变模型，探讨善胃II号方对胃癌前病变的治疗机理。 1材料与仪器 动物健康SPF级Wistar雄性大鼠130只，体质量g，由 卫生部生物制品检定所动物中心提供。 试剂与仪器N-甲基-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)为 Fluk A公司产品；P16、rasP21单克隆抗体均为美国 Santacruz公司产品；兔SP检测试剂盒、DAB显色试剂盒、 多聚赖氨酸均由北京中杉金桥生物技术有限公司提供；维酶 素片为北海阳光药业有限公司产品。高速离心机Hita chiHimaclR21型日本产品；电热恒温水浴箱型，上海产；光 学显微镜01ympusBX60型，日本产品；轮转式组织切片机， 莱佧2135型，德国。 中药制剂善胃II号方由天花粉20 g，玉竹15g，沙参15g， 麦冬30g，赤芍15g等药味组成，由天津市南开医院研究所 制成每毫升含lg生药的水煎液。 2 方法 动物分组将130只Wistar雄性大鼠随机分为4组，即空 白组20只，模型组30只，中药组4 0只，西药组40只，除 空白组对照外，其余三组进行造模，造模结束后，在相同条 件下分笼饲养。 动物模型的建立给予大鼠100ug/ml的MNNG溶液灌胃， 药量为20 ml/kg,隔天1次，灌胃4周后，除自由饮用100 U g/mlMNNG溶液30周外，同时每只大鼠每3天给予1ml无 水乙醇1次，每进食2d禁食ld，进食当天下午自由饮用 20mmol/L(%)脱氧胆酸钠溶液。每周用钳子夹住大鼠尾部一 次，使之保持激怒、争夺状态，持续lOmin，持续30周。空 白对照组10只，每天自由饮用自来水。上述各组均以混合 饲料喂养30周。 治疗方法在造模30周结束后，中药组用lg/ml的善胃 II号方水煎液以ml/kg的药量灌胃，1次/d;西药组将维酶 素片研碎制成g/ml的混悬液以ml/kg灌胃，1次/d;两用药 组用药时间均为6周。模型组和空白组以ml/kg生理盐水灌 胃，1次/d;持续时间均为6周。 标本采集及病理组织学、免疫组化染色上述各组于第30 周予10°/。水合氯醛(3ml/kg腹腔注射)麻醉后处死动物， 露并游离胃将胃沿胃大弯切开，按照胃底、胃体、小弯、幽 门、贲门处分别取材,4%中性甲醛固定，石蜡包埋，切片厚 6um, HE染色，镜下观察病理形态学改变。另外行 P16、rasP21免疫组化检测。 病理组织评分 病理组织学判断标准以出现胃黏膜上皮异型增生，肠上 皮化生判断为胃癌前病变，诊断标准如下：(1)肠上皮化生： 胃黏膜上皮细胞可见肠上皮的杯状细胞。(2)轻度上皮异型 增生：鳞状上皮增厚，有一定异形性，基底膜完整，腺体明 显增多，腺腔扩大，腺细胞核亦增多，异形性不明显。(3) 重度上皮异型增生：鳞状上皮增厚，有一定异形性，偶见核 分裂，基底膜完整，腺体明显增多，腺腔扩大，腺细胞核深 染，有一定异形性，未见核分裂。 病理检验评定标准参照XX年上海全国第二届慢性胃炎 共识会议通过的