第七章++基因治疗讲义教材.pptVIP

第七章 基因治疗;一、 基因治疗的概念;;基因治疗的前提条件 ;基因治疗的策略 ;基因治疗的两种途径 ;二、基因治疗的基本程序 ;1. 目的基因的选择和制备 ;2. 靶细胞的选择 ;靶细胞的选择 ;常用的靶细胞;3.转移载体的选择与细胞转染 病毒感染、显微注射、电穿孔、化学转染试剂等。 4.外源基因的表达及检测 ;第二节 基因治疗的载体 ;一 、病毒载体;逆转录病毒载体 retrovirus;5’ LTR LTR 3’;5’ LTR LTR 3’;逆转录病毒(retrovirus);逆转录病毒的优缺点;2. 腺病毒载体(AV) ;腺病毒的结构 ;Adenovirus;腺病毒基因组DNA;基因组DNA长36kb，两端各有一个ITR，ITR内侧为病毒包装信号。;腺病毒载体的构建;腺病毒载体的包装;腺病毒的优缺点;腺病毒(adenovirus)载体的优点;;Gelsinger Case;3. 腺伴随病毒载体（AAV） ;腺伴随病毒载体的基因组;在人体，AAV特异整合到19号染色体上，是唯一一种以位点特异性方式整合的真核病毒，从而避免了随机整合而导致宿主细胞突变的潜在危险性。 AAV载体是缺失病毒结构基因，仅保留两个ITR。 使用AAV载体安全，但缺乏高效的包装细胞。 ;二 非病毒载体 ;1. 裸露DNA ;直接注射法;2. 脂质体法;Liposomes; 优点;Gene Therapy: Delivery Vehicle;第三节 重要疾病的基因治疗 ;一、遗传病的基因治疗;1. 血友病B;β地贫是由于β珠蛋白基因突变或缺失造成， β珠蛋白肽链合成减少，引起患者溶血性贫血。;β地贫的基因治疗;cftr基因突变引起 正常的CFTR引导氯离子穿过细胞膜 患者肺细胞分泌过量的黏液，呼吸困难 ;Cystic Fibrosis: Finding the Gene;囊性纤维化的治疗;4. 严重免疫缺陷症(SCID);严重免疫缺陷症(SCID)的治疗;Adenosine deaminase;二 肿瘤的基因治疗;1. 针对抑癌基因治疗;2. 针对癌基因治疗;3. 自杀基因疗法;自杀基因疗法;“自杀基因” 疗法;“自杀基因” 疗法;“自杀基因” 疗法;4. 耐药基因治疗; 人类MDR1基因产生一种糖蛋白P-gp, 是ATP结合蛋白，对多种抗肿瘤药物产生外排作用。;5. 抑制血管肿瘤生成;VEGF促进血管生成;三 病毒病的基因治疗;1. 病毒性肝炎;艾滋病（AIDS）;HIV病毒的分子结构;HIV模型图; HIV基因组结构： 由两条单链RNA组成，每个RNA基因组约为9.7k，在RNA5′端有一帽结构（m7G5ppp5’GmpNp）, 3′端有poly（A）尾巴。HIV的主要基因结构和组合形式与其他反转录病毒相同，均由5′末端长重复（long terminal repeat， LTR）、结构蛋白编码区（gag）、蛋白酶编码区（pro）、具有多种酶活性的蛋白编码区（pol）、外膜蛋白（env）和3′末端的长重复LTR区组成。; HIV较其他反转录病毒复杂，因为它有较多的调节基因，HIV1基因编码区有很多重叠，尤其在基因组3′端。其部分基因如Tat和Rev是不连续的，被插入的内含子分隔成两个外显子。HIV1至少有4个功能性的剪接供体位点和6个剪接受位点. ;HIV的生活周期： 亲代病毒 → 与细胞表面CD4分子结合→ 进入细胞→ 脱去核心蛋白→ cDNA→ 进入细胞核形成环状DNA→ 整合进染色体DNA→ 原病毒→ 转录成mRNA→ 子代病毒RNA→ 组装成病毒颗粒→ 病毒释放→ 子代病毒;艾滋病的致病原因;艾滋病的治疗;RNAi：RNA干涉技术;;RNA干涉的机制;RNAi的应用