免疫印迹法Western-blotWB.PPT

免疫印迹技术ENA测定 自身抗体的检测方法 免疫荧光法 (Immunfluorescence Assay, IFA) 酶联免疫吸附法 (Enzyme-linked Immunosorbant Assay, ELISA) 免疫印迹法 (Western-blot, WB) 放射免疫法 (Radioimmunoassay,RIA) 对流免疫电泳及免疫双扩散法 ELISA: ENA谱 条带印迹法: ENA谱 条带印迹法: ENA谱 免疫印迹法 免疫斑点法（Immunospot） 纯化可提取性细胞核抗原（ENA）包被于硝酸纤维膜上，待测血清标本与之反应，如存在相应抗体，则会结合上去，并进一步结合酶标记的二抗，经酶底物显色即可观察到相应的抗体。 试剂 样本稀释液:直接使用 工作洗涤液：试剂盒内浓缩洗涤液用蒸馏水作1:10稀释. 酶标记二抗:直接使用 底物:直接使用 操作步骤 润膜：取出反应槽，每槽加入1.5ml样本稀释液，缓慢于室温孵育5分钟,将膜条充分润湿。 加样：然后在每个槽中加入待检血清或质控血清15μl，充分混匀，缓慢在室温摇床上孵育30分钟。 洗涤：弃去槽内液体，在吸水纸上拍干，用洗涤液洗涤4次，每次每槽加稀释洗涤液1.5ml，洗涤5分钟。 操作步骤 加酶：每槽加入样本稀释液1.5ml，酶标抗体150μl，混匀，缓慢在室温摇床上孵育30分