苜蓿中华根瘤菌烯酯酰ACP还原酶FABI2的.PDFVIP

第 33 卷 第 5 期 天津科技大学学报 Vol. 33 No. 5 2018 年 10 月 Journal of Tianjin University of Science Technology Oct. 2018 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510 数字出版日期：2018-06-26 ；数字出版网址：/kcms/detail/12.1355.N1443.008.html 苜蓿中华根瘤菌烯酯酰 ACP 还原酶 FABI2 的 原核表达纯化以及多克隆抗体的制备 1 2 1 张亚璇 ，王海洪 ，樊振川 (1. 天津科技大学大健康生物技术研究所，天津市大健康生物技术国际联合研究中心， 天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457 ； 2. 华南农业大学生命科学学院，广州 510642) 摘 要 ：烯酯酰 ACP 还原酶基因fabI 是脂肪酸合成途径中的关键基因 ，苜蓿中华根瘤菌 (Sinorhizobium meliloti)基因 组中有这一基因的同源基因 fabI1 和 fabI2 ，为了对中华苜蓿根瘤菌烯酯酰 ACP 还原酶基因 fabI2 的功能进行深入研 究，本实验进行该基因多克隆抗体的制备．从已有的 pET-28b-FABI2 质粒中扩增出目的片段 ，构建了带有 GST 标签的 原核表达载体 pGEX-2T-FABI2 ，将两个标签的表达载体转入大肠杆菌 (Escherichia coli)BL21 (DE3)后 ，在 0.1,mmol/L 4 4 IPTG、20,℃、185,r/min 条件下诱导 6,h ，分别获得相对分子质量约为 2.8 ×10 、5.4 ×10 表达 fabI2 的重组蛋白，且均在 上清液中以可溶性蛋白的形式存在．将经 Ni 柱亲和纯化的 6 ×His-FABI2 融合蛋白免疫新西兰大白兔，4 次免疫后测 效价达 256,000．进一步将抗血清经过 Protein A 纯化获得了高特异性和灵敏度的多克隆抗体．以得到的抗体为一抗， 另一个标签的抗原上样进行免疫印迹 (Western blot)检测 ，为单一条带，说明制备的多克隆抗体能够很好地识别 FABI2 蛋白 ，并且排除了标签所产生的抗体对 Western