糖尿病肾病微循环障碍发生机制及中药复方干预的作用.docVIP

糖尿病肾病微循环障碍发生机制及中药复方干预的作用 　　摘要：目的：观察中药复方对早期糖尿病肾病大鼠肾脏血流动力学影响及其机制。方法：采用高糖高脂饲料喂养及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立了早期糖尿病肾病(DN)大鼠模型。检测血糖，尿微量白蛋白(UAIB)，肾小球滤过率(GFR)，血栓素(TXB)，6-酮前列腺素(6-keto-PGF)水平，并用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测肾皮质中血小板衍化生长因子-B(PDGF-B)基因水平。结果：DN大鼠血糖，UAIb及TXB明显升高，6-keto-PGF下降及肾皮质PDGF-B基因表达明显上调。用中药复方治疗后血糖，UAIb及TXB下降，6-keto-PGF增高，下调PDGF-B基因的过度表达，并发现PDGF―B基因水平与UAIb、TXB2均呈正相关(γ=0.5204，0.5011，P0.01，0.05)。结论：中药复方有改善DN早期肾内微循环的作用，减轻DN早期肾小球高滤过、高灌注，改善肾功能。改善肾脏血流动力学可能是中药复方防治DN早期作用机制之一。该作用可能与抑制肾脏内PDGF-B基因过度表达有关。 　　关键词：中药复方；糖尿病肾病；At小板衍化生长因子-B基因；微循环 　　中图分类号：R285.5 　　文献标识码：A 　　文章编号：1673-7717(2007)12-2605-04 　　 　　糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DN)微血管并发症之一。肾脏血流动力学改变异常是DN微循环障碍的早期表现，在其发病中起关键作用。血流动力学异常是造成DN蛋白尿及肾小球硬化的重要原因之一。在西方国家DN已成为终末期肾病的首要原因。早期DN突出表现为肾小球高滤过、肾脏肥大和间断性尿蛋白的排泄率增加。持续的血流动力学异常可导致微血管结构损伤。目前研究认为与肾小球血液动力学相关的主要细胞因子有血小板源生长因子(PDGF)。为此本文探讨DN肾脏内PDGF基因水平与肾内微循环的关系，旨在揭示DN发病机理及其药效学机制。 　　 　　1.材料和方法 　　 　　1.1材料实验于2005年1月-2005年12月在沈阳军区总医院实验动物中心。选择SPF级Wistar大鼠72只，雄性，体重(200±20)g，由沈阳军区总医院实验动物中心提供。动物使用许可证：SYXK(军2002-019)。 　　 　　1.2中药复方制剂 由黄芪、黄精、山药、大黄、丹参、茯苓、泽泻及益母草药物组成，购于沈阳军区总医院药局，由沈阳军区总医院中药局制剂室煎制。 　　1.3链脲佐菌素(STZ)　为美国Sigma公司产品，购于北京邦定泰克生物制药有限公司。临用前溶于0.1mol/L，pH4.2的无菌枸橼酸钠缓冲液配成1％溶液。 　　 　　2.实验方法 　　 　　2.1DN大鼠模型的建立选取健康雄性Wistar大鼠72只，适应性饲养1周。1周后随机选12只为正常对厢组，给予普通饲料，余60只给予高糖高脂饲料，喂养1个月后造模。造模前禁食12h，然后以50mg/kg STZ一次腹腔注射，正常对照组注入等容量枸橼酸缓冲液。72h后大鼠眼眶采血测定空腹血糖(FBG)，造模过程中死亡1只，血糖值未达标3只。血糖值大于16.7mmol/L的56只，列入观察对象。 　　 　　2.2动物分组及给药　将造模成功的56只DN大鼠，按血糖进行随机区组设计分为5组，即模型组、中药低、高剂量治疗组和预防组，每组14只，另12只为正常对照组，共计5组。预防组在成模后立即开始给药，治疗组在成模后2周开始给药。中药治疗组剂量按人体―大鼠体表面积此值换算出大鼠的等效剂量。预防组与低剂量组给予10.15g/(kg?d)；高剂量组给予20.30g/(kg?d)按1mL/100g体重灌胃；正常对照组及模型组按1mL/100g体重灌服相应容量的生理盐水，各组每天灌胃1次，连续6周。大鼠自由饮水，进食，不使用胰岛素和其它降糖药。 　　 　　2.3标本收集　处死前一天用代谢笼收集24h尿液，离心，去除沉渣，一20℃保存待测。实验期间采血，用乙醚轻度麻醉，眼眶静脉取血。各组大鼠实验6周后用3％水合氯醛麻醉，颈动脉取血后处死。处死前测空腹血糖。制备血清，4℃3000 r/min离心5min，取上清-20℃保存待测。并将右侧肾称重后冰浴下快速取肾脏，分离肾皮质，于液氮中冻透后保存于-70℃冰箱备用，待测分子生物学指标。 　　 　　2.4观察指标　血糖、尿微量白蛋白、肾小球滤过率、血栓素、6-酮前列腺素及PDGF-B基因。 　逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾皮质PDGF-B的基因水平，对其表达进行半定量分析。 　PDGF-B、β-actin引物由大连宝生物有限公司合成，序列见表1。 　　 　　 　　2.5RT-P