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响应面法对超声波提取藤茶二氢杨梅素工艺地优化
响应面法对超声波提取藤茶二氢杨梅素工艺的优化-农学论文
响应面法对超声波提取藤茶二氢杨梅素工艺的优化
梁 琍,邱 岚,张 良
(铜仁学院生物与化学工程系/梵净山野生动植物资源保护与利用研究中心/梵净山特色动植物资源重点实验室,贵州 铜仁 554300)
摘要:通过响应面分析法对超声波提取梵净山野生藤茶(Ampelopsis grossedentata)二氢杨酶素的工艺条件进行优化。以乙醇体积分数、料液比、提取时间为影响因素,在单因素试验的基础上,采用3因素3水平响应面分析法,根据Box-Benhnken中心组合试验设计原理,以二氢杨酶素提取率为响应值,进行响应面分析,优化超声提取梵净山野生藤茶中二氢杨梅素的条件。结果表明,超声波提取藤茶中二氢杨梅素最佳工艺条件为乙醇体积分数51.00%、料液比1∶26.00(g∶mL)、超声波时间40.00 min,在此条件下二氢杨梅素的提取率为28.41%,回归模型预测的二氢杨梅素提取率为28.61%,经验证RSD为1.16%,拟合度较好,说明响应面法优化超声提取藤茶二氢杨梅素的工艺条件稳定可行。
关键词 :藤茶(Ampelopsis grossedentata);二氢杨梅素;超声波提取;响应面分析法
中图分类号:S567.5+3;R284.2 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2015)02-0416-05
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.040
藤茶属葡萄科(Vitaceae)蛇葡萄属(Ampelopsis),学名为显齿蛇葡萄 (Ampelopsis grossedentata), 俗称甜树茶、甜茶藤等,是一种多年生的藤本植物,生长在海拔400~1 300 m的山坡、林中、河滩等阴湿和肥沃的土壤中,是一种典型的药食两用植物[1]。藤茶中含有多种化学成分,包括水分、蛋白质、维生素、多酚和黄酮等,其中黄酮类化合物具有最重要的药理作用,而二氢杨梅素是其中最重要的黄酮类化合物,藤茶系目前国内外发现的二氢黄酮类化合物中含量最高的植物[2],经试验证明,二氢杨梅素具有抗氧化、镇痛、止咳、广普抑菌、保肝护肝、降血糖、降血脂、增强人体免疫力以及抑制肿瘤等多种功效[3],具有很高的应用价值。
梵净山位于贵州省东北部江口、印江和松桃3县交界之处,总面积567 km2,主峰凤凰山海拔2 572 m,是武陵山系最高的山体,是一个以珍稀植物和动物为主的国家级自然保护区。1986年被联合国教科文组织批准接纳为世界“人与生物圈”保护区网的成员[4]。该保护区植被类型多样,主要有针叶林、阔叶林、竹林、灌丛、沼泽5个类型[5],植物资源极为丰富,达1 800种[4],是非常宝贵的药用植物资源库。目前关于梵净山野生藤茶二氢杨梅素的提取尚未见报道。
本研究以梵净山野生藤茶为原料,在超声波辅助提取藤茶中二氢杨梅素的基础上,采用Box-Behnken响应面法对提取条件进行优化,为开发梵净山野生藤茶及其综合利用提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
试验所用藤茶采自梵净山,将藤茶在60 ℃下烘干,经高速万能粉碎机粉碎,过40目筛,将其装于干燥试剂瓶,贴上标签作为待测样品。
主要试剂:二氢杨梅素标准品(纯度>98%,上海融禾医药科技有限公司);95%乙醇[分析纯,重庆川东化工(集团)有限公司];无水三氯化铝(天津市博迪化工有限公司)等。
主要仪器:GUTEL超声波清洗器(上海冠特超声仪器有限公司);101-3型电热鼓风干燥箱(北京科伟永兴仪器有限公司);FW80型高速万能粉碎机(北京科伟永兴仪器有限公司);KQ-C型玻璃仪器气流烘干器(巩义市予华有限责任公司);电子分析天平(奥豪斯仪器上海有限公司);SHZ-DIII予华牌循环水真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司);T6型新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)等。
1.2 试验方法
1.2.1 标准曲线的绘制 准确称取二氢杨梅素标准品5.2 mg,用95%的乙醇定容到50 mL容量瓶中揺均,分别吸取溶液0、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25 mL置10 mL容量瓶中,精确加入质量分数为5%的AlCl3溶液3 mL,用95%的乙醇溶液定容到10 mL,揺均后放置40 min,在315 nm的波长下测定吸光度[6],以标准溶液的含量为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线(图1),得到的回归方程为:A=78.686x+0.006 7,R2=0.998 9(n=5)。
1.2.2 藤茶中二氢杨梅素含量的测定 准确称取1 g藤茶粉末放入锥形瓶中,按1∶20(g∶mL,
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