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葡萄品种分子鉴定的研究进展及展望 　　摘要：品种鉴定是葡萄种质资源保存、研究、开发利用以及新品种品种权保护的重要依据。随着分子生物学技术的深入发展，出现了多种基于DNA水平的分子标记技术用于品种鉴定。本文综述了目前国内外几种主要的分子标记技术（AFLP、RAPD、SSR、ISSR、SRAP、SNP、iPBS）在葡萄品种鉴定中的应用与研究进展，并阐述了各种标记方法的基本原理和特点，以期为今后葡萄品种鉴定提供参考依据。 　　关键词：葡萄；分子标记；品种鉴定；研究进展；基本原理；特点 　　中图分类号：S663.101 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2017）15-0015-06 　　葡萄为葡萄科（Vitaceae）葡萄属（Vitis L.）植物，是世界范围内栽培最广泛的树种之一，目前世界已经报道的葡萄品种有6 000～10 000个[1]。在葡萄的生产过程中，优良品种是提高葡萄质量和种植效益的必要条件，也是其产业持续发展的重要保障，回顾我国葡萄产业的发展历程，每一个快速发展时期都伴随着新品种的引进、选育与推广，新品种对促进葡萄产业的发展发挥着越来越重要的作用[2]。 　　葡萄多为无性繁殖，扦插繁殖容易，不同地区之间品种交流频繁，导致其种类和品种繁多，同名异物及同物异名现象严重[3]。另外，由于国内现阶段的种苗市场管理还不完善，部分不法苗木商为了自身利益，导致市场上以劣充优、以假乱真现象时有发生[4]。因此，为了保护育种者的权益及保证葡萄产业健康发展，对葡萄品种进行快速、准确可靠的鉴定显得尤为重要。同时，随着我国加入世贸组织和国际植物新品种保护联盟后，一个新品种的推广、产权保护都必须提供该品种特异的鉴定标记[5]。而传统的品种鉴定都以形态学标记为主，该方法易受环境及季节的影响，且鉴定时间长、工作量大。此外，由于新品种选育技术的同质化，品种之间的形态差异也越来越小，目测区分植株性状就显得越来越困难。 　　近年来，随着分子生物学技术的发展与成熟，使根据遗传物质DNA在不同生物个体之间的差异来鉴别生物物种成为可能，并且取得了显著成果。分子标记技术是一种以DNA多态性为基础，通过检测DNA分子由于缺失、插入、易位、倒位、重排或存在长短与排列不一的重复序列等机制而产生多态性的技术[6]，该技术不受环境因素及发育阶段的影响，具有快速、简单、准确、可靠、稳定、经济等特点。国际植物品种权保护联盟（International Union for the Protection of New Varieties of Plants，?称UPOV）也将DNA分子标记鉴定作为农作物品种DUS（distinctness uniformity and stability）测试的辅助手段[7]。已经发展起来的分子标记多达60多种，应用较广的主要有AFLP、RAPD、SSR、ISSR、SRAP、SNP以及iPBS等。目前，DNA分子标记鉴定技术已在多种作物上开展了广泛的研究，在葡萄品种的鉴定方面取得了很大的进展，本文对目前国内外7种主要的分子标记技术原理以及在葡萄品种鉴定上的应用进展作一综述，以期为今后葡萄品种鉴定技术的选择提供参考依据。 　　1国内外葡萄品种的鉴定技术 　　1.1RAPD技术 　　随机扩增多态DNA（random amplified polymorphic DNA，RAPD）分子标记发展于1990年[8-9]，它是以基因组DNA为模板，利用人工合成的单链随机引物（一般8～10 bp）对其进行PCR扩增，通过凝胶电泳检测扩增片段，从而得到多态性标记的一种技术。RAPD标记简便、快速、成本低，无须了解基因组序列信息，DNA用量少，基于以上优点，被广泛应用于种质资源鉴定及遗传关系分析等方面[10-14]。 　　1997年，Stavrakakis利用15个RAPD标记鉴别了8个希腊品种，结果表明，RAPD标记技术适合用于葡萄品种鉴定[15]。王军等利用RAPD标记技术分别分析了中国野生葡萄和鲜食葡萄，认为RAPD标记技术可有效区分葡萄种质，是一种快速、经济实用的分子标记技术[16-17]。Bajraktari等以Rahovec的6个主栽品种为材料，利用10对高效的RAPD引物对其进行鉴定分析，鉴定结果与形态学检测的结果完全一致，6份种质均被区分开，排除了同名异物的存在[18]。2008年，李玉霞等依据RAPD技术对蛇龙珠葡萄的来源和亲缘关系进行了分析，认为蛇龙珠可能为法国的嘎赫姆奈赫，而非以前被认为的品丽珠[19]。随后，2012年李红娟等利用RAPD分子标记对8个蛇龙珠营养系进行遗传多样性分析，并将其与赤霞珠和品丽珠之间的亲缘关系进行验证，结果显示蛇龙珠的5个营养系之间没有任何差别，其余3个营养系之间却存在一定