蛋清肽酶解工艺及血管紧张素转化酶抑制活性研究-农业机械学报.PDF

２０１０年 ７月 农 业 机 械 学 报 第 ４１卷 第 ７期 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００１２９８．２０１０．０７．０３１ 蛋清肽酶解工艺及血管紧张素转化酶抑制活性研究 刘静波　于志鹏　赵文竹　林松毅 （吉林大学军需科技学院，长春 １３００６２） 　　【摘要】　采用酶法制备蛋清肽，色谱纯化 ＡＣＥ抑制活性组分并鉴定其一级结构。通过考察底物质量分数、加 酶量、酶解温度和ｐＨ值对水解度的影响，结合多元线性回归设计和二次回归正交组合设计建立蛋清 ＡＣＥ抑制肽 酶解工艺模型，并经液相色谱串联质谱鉴定其一级结构。结果表明：最佳酶解工艺为底物质量分数 ８％、ｐＨ值 １０７３、加酶量 １２１４％及酶解温度５６８０℃，酶解物纯化后半抑制质量浓度为０１８ｍｇ／ｍＬ。液相色谱串联质谱鉴 定高活性组分中３种活性肽一级结构，氨基酸序列分别为 ＡｒｇＶａｌＰｒｏＳｅｒＬｅｕＭｅｔ、ＴｈｒＰｒｏＳｅｒＰｒｏＡｒｇ和 ＡｓｐＬｅｕ ＧｌｎＧｌｙＬｙｓ。 关键词：蛋清　ＡＣＥ抑制肽　酶解　优化　纯化　鉴定 中图分类号：ＴＳ２０１１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００１２９８（２０１０）０７０１４７０６ ＥｎｚｙｍａｔｉｃＨｙｄｒｏｌｙｓｉｓＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒＡＣＥｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙＰｅｐｔｉｄｅｓｆｒｏｍＥｇｇＷｈｉｔｅ ＬｉｕＪｉｎｇｂｏ　ＹｕＺｈｉｐｅｎｇ　ＺｈａｏＷｅｎｚｈｕ　ＬｉｎＳｏｎｇｙｉ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＱｕａｒｔｅｒｍａｓｔｅｒＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＪｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００６２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅｐｅｐｔｉｄｅｓｗｅｒｅｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｅｇｇｗｈｉｔｅ，ａｎｄｔｈｅｎｗｅｒｅｐｕｒｉｆｉｅｄａｎｄｔｈｅｉｒｐｒｉｍａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｅｇｇｗｈｉｔｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｐｒｏｃｅｓｓｍｏｄｅｌｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｅｘａｍｉｎｉｎｇｔｈｅｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，Ｅ／Ｓ，ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｐＨ ｖａｌｕｅｏｎｔｈｅｉｍｐａｃｔｏｆｔｈｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｄｅｇｒｅｅ， ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅｌｉｎｅａｒｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｅｓｉｇｎａｎｄｑｕａｄｒａｔｉｃｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ．Ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｗｅｒｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ｇｅｌｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ａｎｄ ｗｅｒｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｔａｎｄｅｍｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｐｒｏｃｅｓｓｗａｓｔｈｅｓｕｂｓｔｒａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ８％，ｐＨｖａｌｕｅｏｆ１０７３，Ｅ／Ｓｏｆ１２１４％ ａｎｄｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ ５６８０℃．ＨｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｗｅｒｅｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｓｅｐｈａｄｅｘＧ ２５，ｔｈｅ５０％ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｓ ０１８ｍｇ／ｍＬ．Ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｑｕａｄｒｕｐｏｌｅｌｉｎｅａｒｉｏｎｔｒａｐｔａｎｄｅｍｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅａｃｔｉｖｅｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎｔｈｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔ，ｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗｅｒｅＡｒｇＶａｌＰｒｏＳｅｒＬｅｕ Ｍｅｔ，ＴｈｒＰｒｏＳｅｒＰｒｏＡｒｇ，ａｎｄＡｓｐＬｅｕＧｌｎＧｌｙＬｙｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　Ｅｇｇｗｈｉｔｅｐｒｏｔｅｉｎ