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重组鱼类干扰素的研究进展 　　摘要：干扰素（Interferons，IFNs）是由免疫细胞分泌的能对几种病原，例如对病毒、细菌、寄生虫和肿瘤细胞等产生应答的一类蛋白质。本文综述了几种经济鱼类的干扰素基因及重组鱼类干扰素的研究进展。 　　关键词：经济鱼类；干扰素基因；重组干扰素 　　干扰素（Interferon，IFN）是一类能够诱导细胞产生抗病毒状态的细胞因子，它不直接参与抗病毒的生物学过程，而是通过产生靶基因下游的效应基因来调控病毒的感染，具有多效能、低分子量、分泌型等特点。干扰素最初是由Issacs等人在鸡胚绒毛尿囊膜细胞的病毒干扰实验中被发现。不同物种间干扰素的基因结构和亚基组成具有较大的差异，根据干扰素与受体结合的方式和其与抗体结合的抗原性不同可分为三类：工型干扰素主要包括α和β，Ⅱ型干扰素只有一个成员为γ型干扰素和Ⅲ型干扰素入。干扰素作为机体最重要的细胞因子之一，主要生物学功能体现为广谱的抗病毒活性和免疫调节能力。根据人和哺乳动物的相关研究，干扰素对病毒防御的主要方式是通过转导信号和激活相关转录，导致下游基因受干扰素的表达调控，生成多种调控因子直接作用于入侵的病毒，保护机体免受感染。 　　斑马鱼（Danio rerio）、大西洋鲑鱼（Salmosalar）和斑点绿河纯（Tetraodon nigroviridis）等鱼类的干扰素基因于2003年被克隆到，之后，许多其他的硬骨鱼的干扰素基因被克隆和鉴定。鱼类的干扰素可以分为两类：Ⅰ型、Ⅱ型（IFN-γ）。工型是最早被发现的IFN家族成员，能够调节多种免疫细胞的发育和分化、诱导表达以及细胞凋亡和抑制肿瘤基因诱导的转化。与鸟类和哺乳动物的工型干扰素基因结构不同的是，鱼类工型基因包含5个外显子和4个内含子，而鸟类和哺乳动物的Ⅰ型干扰素基因不含内含子。在哺乳动物中，Ⅱ型干扰素也叫做IFN-γ，是由一个独立基因编码的，该基因含有4个外显子和3个内含子。Ⅱ型干扰素是一种典型的Th1细胞因子，主要由CD4+Th1细胞和NK细胞产生，能够激活Th1的反应和活化巨噬细胞。鱼类的Ⅱ型干扰素与哺乳动物的Ⅱ型干扰素同源，许多鱼类拥有两种Ⅱ型干扰素（IFN-γ和IFN-γ2）。 　　鱼类是水产养殖中重要的经济物种，随着其规模化、工厂化的高密度养殖，其病害时有爆发，这严重制约了鱼类养殖业的可持续健康发展，给养殖生产者造成了巨大的经济损失。在鱼类养殖过程中，除加强综合管理外，还要针对不同鱼的品种的特定疾病采取预防和治疗措施，但效果甚微。为达到预防病原菌和病毒的目的，提高鱼类自身免疫能力对于增强其抗病力至关重要。因干扰素的生物学作用，科研工作者已将部分鱼类的干扰素基因通过基因工程技术制备重组鱼类干扰素，为今后取代抗生素或化学药物在鱼类病害防治上的应用提供了参考。下面，简要介绍几种经济鱼类的干扰素及其干扰素基因的重组表达情况。 　　1 草鱼的干扰素及其基因的重组表达与应用 　　草鱼是我国重要的淡水经济鱼类，主要以混养为主，但养殖过程中出现的“四病”及病原微生物对草鱼产量及质量造成一定的损失。很多学者致力于提高草鱼免疫力的研究。起初，研究者将人α-干扰素（hu-IFN-α）基因序列转入到草鱼基因组内，成功获得表达人α-干扰素蛋白的转基因草鱼，通过一段时间的养殖发现，转基因草鱼的抗病能力较普通草鱼的抗病能力高；后续实验证明转植基因能够遗传给后代，且雌核发育阳性率高，但在遗传过程中受外界或者遗传因素的影响会有部分丢失。 　　草鱼的干扰素及相关基因研究较为广泛，主要分为以下几类： 　　Ⅰ型干扰素：MTT法（MTT assay）测定原核表达并经纯化后的重组草鱼Ⅰ型干扰素（rCi-IFN）对草鱼肾细胞系CIK细胞的抗草鱼出血病毒（Gras Carp Hemorrhage Virus，GCHV），结果显示rCiIFN的生物活性与其浓度呈正相关关系。后续通过注射实验检测到重组rCiIFN蛋白能够上调干扰素相关基因IFN、IRF-1、IRF-7、STAT-3、MX、PKR的表达，且效果较聚肌胞苷酸（polyinosinic-polycytidylic acid，polyI：C）的诱导效果好。目前，草鱼rCiIFN已被大量发酵，并找到最佳给药方式，且将草鱼rCiIFN蛋白掺入饲料中可有效提高草鱼幼鱼成活率。工型干扰素是多基因家族，主要包括IFNa、β等10余种亚型，最主要且研究最多的应属IFNa、β两种基因。草鱼IFNa已被成功扩增出目的序列并获得高纯度rCiIFNa蛋白，抗病毒实验证明其具有生物学活性，且对于鱼类细胞系抗病毒效果良好。 　　干扰素γ：草鱼干扰素γ也称为干扰素-rel（IFN-rel），利用同源克隆并结合RACE的方法成功获得草鱼IFN72的cDNA全长序列。已构建pET30a（+）-