常见的蛋白质相互作用.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * 蛋白质相互作用 2012-5-22 FRET ELISA 蛋白质芯片 SPR ITC FRET现象 当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠，并且两个分子接近到一定距离（1-10nm）时，就会发生一种非放射性的能量转移，激发供体而产生的荧光能量正好被附近的受体吸收，使得供体发射的荧光强度衰减，受体荧光分子的荧光强度增强。 FRET技术原理 以适当频率的光能照射供体, 会有效地产生振荡偶极子, 与近处的受体探 针的偶极子产生共振。这种偶极子与偶极子之间的相互作用将供体荧光团的能量非放射性地转移到受体荧光团。对于特定的供体-受体对, 供体丢失的能量就是受体得到的能量。Forster 显示这个过程的效率依赖于供体和受体间距离六次幂的倒数:E =1/{1 +(R/R0)6}(R0是一半能量发生转移的距离)，还依赖于染料的光谱特性及它们的相对方向。 FRET应用 FRET技术已广泛用于研究胞内及跨膜蛋白的磷酸化过程、蛋白质在胞内的折叠、蛋白质之间的相互作用等。将两种蛋白质分别使用CFP／YFP(或BFP／GFP)标记，当两者在同一细胞中表达时，只要检测到FRET发生，则证明两蛋白质问距离小于10nrn，存在相互作用。 ELISA原理 ELISA的类型 1、双抗体夹心法 将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗。