香附药材HPLC指纹图谱的研究.docVIP

香附药材HPLC指纹图谱的研究 　　[摘要] 目的 建立香附药材HPLC指纹图谱，结合化学计量手段，对多批次药材进行质量控制。 方法 以Kromasil 100-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，以甲醇（A）-水（B）为流动相，梯度洗脱，流速为1.0 ml/min，检测波长为254 nm；柱温25℃，对10批药材样品进行相似度分析、聚类分析和主成分分析。 结果 建立了香附药材专属性的HPLC指纹图谱，标示了16个共有指纹峰，10批样品分为3大类。 结论 将HPLC指纹图谱与化学计量手段相结合，可有效对香附药材进行真伪鉴别和质量评价，为提高其整体质量控制提供参考。 　　[关键词] 香附；高效液相色谱法；指纹图谱；相似度评价；聚类分析；主成分分析 　　[中图分类号] R927.11 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）01（a）-0004-04 　　S 香附为莎草科植物莎草（Cyperus Rotundus L.）的干燥根茎，具有疏肝解郁、理气宽中、调经止痛的功效，用于治疗肝郁气滞所致的胸胁胀痛、疝气疼痛、乳房胀痛、脾胃气滞、脘腹痞闷、胀满疼痛、月经不调、经闭痛经之症，为妇科常用药[1]。《本草纲目》称之为“气病之总司，女科之主帅”，主产于山东、浙江、湖南、河南等地，以山东为道地药材。香附主要含挥发油类成分，此外还有萜类、黄酮类、酚类、生物碱等化合物[2]。现代药理研究显示，香附具有抗炎、抗血小板、降血糖、保护神经系统、抗过敏等作用[3]。指纹图谱是基于对中药物质群整体作用的认识，借助于波谱和色谱等技术获得中药化学成分的光谱或色谱图，是实现鉴别中药真实性、评价质量一致性和产品稳定性的可行模式，具有信息量大、特征性强、整体性和模糊性等特点[4]。本研究采用高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）对10批香附药材进行研究并建立指纹图谱，旨在为香附药材的质量控制提供科学依据。 　　1 仪器与材料 　　1.1 仪器 　　KQ-100B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；T-214型电子分析天平（Denver公司）；Waters e2695高效液相色谱系统，Empower工作站，含四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器（Waters公司）。 　　1.2 材料 　　甲醇（Honeywell公司，色谱纯）；水为超纯水（实验室制备）。α-香附酮对照品（批号：110748200507）购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用。10份不同批次或产地的香附药材样品均由广州星群（药业）股份有限公司提供，经湖南中医药大学药学院药用植物教研室王智老师鉴定为莎草科植物莎草的干燥根茎，具体信息见表1。 　　表1 香附药材样品来源 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱：Kromasil 100-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-水（B）为流动相系统梯度洗脱（0～45 min，40%→80%A；45～60 min，80%A）；流速：1.0 ml/min；检测波长：254 nm；柱温：25℃；进样体积：10 μl。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　精密称取α-香附酮对照品适量，加甲醇溶解定容至10 ml，得到浓度为0.0261 mg/ml的对照品溶液。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　取香附药材粉末（过60目筛）约1 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 ml，密塞，称重，超声处理（功率160 W，频率59 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。 　　2.4 方法学考察 　　2.4.1 精密度试验 取同一批（XG140501）药材粉末，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，连续进样6次，测定指纹图谱。以7号峰的保留时间和峰面积为参照，计算样品中所含16个共有峰的相对保留时间和相对峰面积。各共有峰相对保留时间的RSD为0.003%～0.130%，相对峰面积的RSD为0.15%～2.10%，提示仪器的精密度良好。 　　2.4.2 重复性试验 取同一批药材粉末，按“2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别进样6次，测定指纹图谱。考察样品中所含16个共有峰的相对保留时间和相对峰面积，各共有峰相对保留时间的RSD为0.01%～0.48%，相对峰面积的RSD为0.01%～2.77%，提示方法的重复性良好。 　　2.4.3 稳定性试验 取1份药材粉末，按“2.3”项下方法制备供试