常见的细胞工程.pptVIP

定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 胰蛋白酶处理 取出组织 胚胎或幼龄动物器官组织 剪碎 单个细胞 细胞悬液 转入培养瓶内培养 （贴壁生长、接触抑制） ①原代培养 （3）过程 原代培养 增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养 去掉组织间蛋白 加培养液 细胞贴壁过程 细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴 附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ■对培养瓶或培养皿壁要求： 表面光滑、无毒、易于贴附。 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 接触抑制 50代以后 失去接 触抑制 接触抑制 部分细胞突变，获得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋白减少。 ②传代培养 定义： 将接触抑制的细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养。（即分瓶培养的过程） 出现接触抑制 ①无菌、无毒的环境 （灭菌，添加一定量的抗生素，定期更换培养液） ②营养（液体培养基） （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等） ③温度和PH 温度：36.5+0.5℃，pH：7.2～7.4 ④气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） （4）动物细胞培养条件 含未知成分，促进细胞顺利的生长、增殖 离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力 能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？ 比较项目 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 植物组织培养 动物细胞培养 细胞的全能性 固体培养基 蔗糖 植物激素 完整植物体 快速繁殖、育种和生产细胞产物等 细胞增殖 液体培养基 葡萄糖 动物血清 细胞群体 获得细胞或细胞分泌蛋白等 （5）植物组织培养、动物细胞培养的比较 细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过某种工程学手段，在细胞整体水平或细胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。 细胞工程 理论基础 操作水平 目的 优点 细胞整体水平或细胞器水平 细胞生物学和分子生物学 改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品 按照人类的意愿定向改造生物遗传性状 克服远缘杂交不亲和障碍 主要理论基础 植物细胞工程 基本技术 植物组织培养技术 植物体细胞杂交技术 植物细胞的全能性 一、植物细胞工程 1、植物组织培养技术的理论基础是 植物细胞具有全能性 （1）细胞的全能性概念 具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞，都具有发育成完整生物体的潜能，即每个细胞都具有全能性。 （2）为什么细胞具有全能性呢（物质基础）？ 每个细胞具有发育成完整个体所需的全部遗传信 息 （基因）。 （3）为什么每个细胞都具有发育成完整个体的全部遗传信息呢？ 生物体每一个体细胞都是一个受精卵经有丝分 裂产生的。 （4）生物的哪种细胞最容易发育生物体（全能性最高）？ 受精卵生殖细胞体细胞; 植物细胞动物细胞 体细胞：分化程度低的分化程度高的 细胞分裂能力强的细胞分裂能力弱的 幼嫩的衰老的 （5）为什么体内细胞没有表现出全能性，而是分化成为不同的组织、器官？ 基因在特定空间和时间条件下选择性表达的结果。在个体发育的不同时期，生物体不同部位的细胞表达的基因是不同的，合成的蛋白质也不一样，从而形成了不同的组织和器官。 （6）植物细胞全能性表达需要什么条件呢？ 处于离体状态；一定的营养物质、激素和其他外界条件 1 2 3 4 5 再分化 (愈伤组织) 6 脱分化 (胚状体) （1）概念：在无菌和人工控制条件下,将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工控制的培养基上，给予适宜的条件，诱导产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。 2、植物组织培养技术 （2）植物组织培养的过程 离体的器官、组织或细胞 脱分化 （有丝分裂） 愈伤组织 再分化 发育 (分裂分化) 根、芽 植物体 愈伤组织： 细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的、无定形状态的具有分生能力薄壁细胞。 已经分化的细胞，经过诱导后，失去其特有的结构和功能而变成未分化的细胞。 脱分化： 再分化： 脱分化生产的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程。 切取 形成层 无菌接种 诱导愈伤组织 的形成 试管苗的形成 培养室 移栽 脱分化 再分化 （3）植物组织培养的条件 ①离体植物器官、组织或细胞 ②无菌条件 ③植物外源激素（生长素、细胞分裂素等） ④适宜的温度、pH、光照等的控制 ⑤一定的营养物质（培养基） 无机营养成分：无机盐离子 有机营养成分：