通心络对局灶性脑缺血大鼠微血管新生与其代偿作用的实验-研究.pdfVIP

中文摘要 通心络对局灶性脑缺血大鼠微血管新生及其代偿作用的实验研 究 摘 要 目的：本研究以络病理论为指导，采用开颅结扎法阻断大鼠一侧大 脑中动脉制作局灶性脑缺血大鼠模型，选用络病理论的代表方剂一通心 络，通过观察行为学评分、脑梗死面积的变化，以及对局灶性脑缺血大鼠 微血管密度、直径和血流灌注量、微血管新生相关因子及其表达的影响， 以期从促进脑微血管新生角度探讨通心络对缺血性脑卒中神经功能恢复 的治疗作用，为络病理论在缺血性脑血管病应用中的科学价值提供实验数 据支持。 方法： 1通心络对局灶性脑缺血大鼠神经行为学和脑梗死面积的影响： 健康SPF级雄性SD大鼠，随机分为六组：假手术组、模型组、通心 一侧大脑中动脉制作局灶性脑缺血大鼠模型，假手术组大鼠只挑开脑膜， 不结扎血管。各用药组均在动物苏醒后灌胃，假手术组和模型组给予等体 通过姿势反射试验、前肢肌力测试试验、横木行走试验进行神经行为学评 分，眦染色观察组织形态学改变，TTC染色测定脑梗死面积变化。 2通心络对局灶性脑缺血大鼠微血管密度、直径及血流灌注量的影 响： 实验造模及分组、给药方法同前，各组于术后14d，心脏灌注固定， 免疫组化方法检测大脑皮层缺血区微血管密度；用异硫氰酸荧光素标记的 织固定后振动切片机冠状切片，用激光共聚焦显微镜进行扫描，将所获得 的图像进行三维重建，用绿色荧光所占的体积表示血浆容量与扫描区总容 量的百分比表示血流灌注量，用40倍光镜下获得的图像观察数目和血管 形态。 中文摘要 3通心络对局灶性脑缺血大鼠血管新生相关因子及其表达的影响： 实验造模及分组、给药方法同前，各组于术后14d，颈动脉采血和断 头取脑，常规分离血清后，按试剂盒说明书要求测定血清NO、VEGF水 达；以逆转录．聚合酶链反应(RT．PCR)法检测脑组织Ang．1mlwA和 mRNA表达的变化。 Ang一2 结果： 1通心络对局灶性脑缺血大鼠神经行为学和脑梗死面积的影响： 神经行为学评分结果：脑缺血3d后，通心络大剂量明显改善局灶性 脑缺血模型大鼠行为学评分(PO．05)，通心络中、小剂量组改善不明 显；脑缺血7d后，通心络大、中剂量组和尼莫地平组均能改善脑缺血大 鼠行为学评分(PO．05)，通心络小剂量组改善不明显；脑缺血14d后， 通心络大、中、小剂量组和尼莫地平组均能改善脑缺血大鼠行为学评分(P O．05)，且通心络大剂量组优于通心络小剂量组(PO．05)。 组织形态学结果：假手术组大鼠脑组织细胞形态规则，连接紧密， 基底膜完整。模型组大鼠细胞周围间隙增宽，神经细胞大小不等，毛细血 管萎缩，神经细胞肿胀，排列紊乱，细胞核深染固缩，部分胞质自溶，周 围出现较大空泡，缺血脑组织形态改变严重。各用药组大鼠均可见神经细 胞缺血性改变减轻，细胞轻度肿胀，间质较致密，坏死细胞数量减少。其 中通心络大剂量组可见神经细胞缺血性改变明显减轻，血管周围间隙和神 经细胞周围间隙增宽明显减轻，优于模型组，坏死细胞数量明显减少。 脑梗死面积测定结果：脑缺血3d后，通心络大、中剂量组能明显缩 小脑缺血大鼠脑梗死面积(PO．01)，且通心络大剂量组优于通心络中 剂量组(PO．05)。脑缺血7d后，通心络大剂量组、通心络中剂量组、 尼莫地平组均能缩小脑缺血大鼠脑梗死面积(PO．05)。脑缺血14d后， 通心络大、中剂量组均能明显缩小缺血大鼠脑梗死面积(PO．05，P O．01)。 2通心络对局灶性脑缺血大鼠微血管密度、直径及血流灌注量的影 响： 微血管密度测定结果：正常脑组织中有少数散在分布，模型组蛋白表 达有所增强，通心络大、中剂量组、尼莫地平组CD3。蛋白阳性分布密集 中文摘要 且着色显著，均强于模型组，其中以通心络大剂量组为优。 脑微血管形态、直径测定结果：与模型组比较，各用药组大脑皮层微 血管均呈现迂曲不规则形状，其中通心络大剂量组血管明显呈迂曲、不规 则，微血管分支数目增多，血管之间靠拢形成连接。假手术组微血管直径 为6．80±O．93岬，其中6。7岬之间的血管占35％，其余各段分布较