医疗医学实验三 对流免疫电泳.pptVIP

实验三 对流免疫电泳 【实验目的】 掌握对流免疫电泳的原理、操作方法、 结果判定及了解其用途。 【实验原理】 带电胶体颗粒可在电场中定向移动，移动速度及 方向与颗粒所带电荷及分子量大小有关。蛋白质 为两性电解质，每种蛋白质都有自己的等电点， 在pH值大于其等电点的溶液中，羧基解离多，蛋 白质带负电，向正极泳动；在pH值小于其等电点 的溶液中，氨基解离多，蛋白质带正电，向负极 泳动。pH值离等电点越远，所带电荷越多，泳动 速度也越快。因此，可通过控制溶液的pH值的方 法，使抗原抗体在通电的琼脂板上泳动，进行抗 原抗体成分的分析，或进行抗原抗体的检测。 电泳缓冲液pH为8.6，在这种溶液中： 抗原分子羧基解离带负电荷，且分子量小，泳动速度快，能克服琼脂中的电渗阻力，故在电泳时从负极向正极移动。 抗体属球蛋白，所暴露的极性基团较少，在碱性缓冲液电离也少，只带微弱的负电荷，且相对分子质量较大，电泳力较小，泳动速度慢，克服不了电渗阻力，在琼脂电渗力作用下反而由正极向负极移动。 将抗体置正极端，抗原置负极端，则电泳时抗原抗体相向泳动，在两孔之间相遇，在比例最合适处就会形成白色沉淀线。 免疫电泳的特点： 免疫电泳是由琼脂扩散与电泳结合而成的一种检测技术。抗原抗体在凝胶中扩散的同时，加入电场力的作用，使抗体或抗原在凝胶中的扩散移动速度加