第8讲成体干细胞及组织工程学分析.pptxVIP

成体干细胞及组织工程学;什么是成体干细胞？（somatic stem cell or adult stem cells ）;主要的成体干细胞：;CSCs and stem cell niche;成体干细胞来源：;成体干细胞三大特征：;胚胎干细胞与成体干细胞;多能干细胞能产生多种类型细胞的能力，但却失去了发育成完整个体的能力，发育潜能受到一定的限制。 单能干细胞只能向单一方向分化，产生一种类型的细胞。;干细胞横向分化（transdifferentiation）;造血干细胞（HSC）;HSC特性：;造血干细胞的分化： ;造血干细胞微环境 ;造血干细胞的分离与鉴定;骨髓间充质干细胞 (MSC) ;16;17;骨髓中的多向分化干细胞（骨、软骨、脂肪、肌细胞、心肌细胞、成纤维细胞、肝细胞）； 容易获得； 体外扩增109倍仍不失多向分化潜能； 外源基因容易插入； 免疫原性较弱； 常见的组织工程种子细胞 ;肝干细胞的可能位置：位于Hering’s管区域内，直接参与肝脏的生长和发育，同时也是肝细胞再生的重要细胞来源。 HSC、脐带血干细胞和MSC在一定培养条件下也可以向肝细胞分化。;角蛋白19(cytokeratin 19, CK19) 神经细胞粘附分子(neural cell adhesion molecule，NCAM) 上皮细胞粘附分子(EpCAM) claudin-3(CLDN-3);细胞因子： 成纤维细胞生长因子2(FGF-2)、人activin A、 肝细胞生长因子(HGF)、骨形成蛋白2(BMP2) 化学诱导剂： DMSO、地塞米松(Dex)、丁酸钠(NaB)、 制瘤素(OSM);实例： 2000年8月，日本筑波大学把鼠肝干细胞体外培养后，移植到肝功能衰竭的鼠肝中，40天后干细胞发育成新的肝组织，分泌出鼠肝特异清蛋白。 ;1992年Reynolds和Weiss首先从成年小鼠的纹状体和海马中分离出NSC。 1998年，Okano报道，成人脑室下区存在神经干细胞。 1999年，Johnasson证实，成年哺乳动物脑室管壁的室管膜细胞是神经干细胞。 1999年，Doetsch报道，成年哺乳动物脑内室下区的星形胶质细胞是神经干细胞。;巢蛋白(nestin)： 一个比较公认的神经干细胞标志物。 仅在胚胎早期神经上皮表达，出生后停止表达。一旦神经前体细胞分化即停止表达 A2B5蛋白 Vimentin 胶质细胞标志物(GFAP)等 细胞表面抗原：CD133+/CD34-/CD45-； ;帕金森病(Parkinson disease，PD) 阿尔兹海默病(Alzheimer disease，AD) 亨廷顿病(Huntington disease，HD);首都医科大学附属神经外二科主任黄红云等自2001年起在世界上率先开展流产胎（婴）儿嗅鞘细胞(一种NSC)移植治疗脊髓损伤。 已经治疗近400例，部分完全性脊髓损伤患者恢复部分功能。 ;表皮干细胞(Skin stem cell, SSC);表皮干细胞;表皮干细胞终生都在更新； 体外培养表皮干细胞技术已经非常成熟； 治疗的效果易于观察，万一发生不良反应可方便地移去；;1996，我国徐荣祥在烧伤创面上找到皮肤组织 原位再生的原始细胞“角蛋白十九型皮肤干细胞”。 并成功诱导其分化生成皮肤细胞，使受伤的皮肤得以 迅速康复，实现人体器官原位再生，获得美国专利。;组织工程（Tissue Engineering）;种子细胞 支架材料和细胞外基质 细胞与材料的体外复合培养(细胞生长环境方式、应力，材料改性等) 体内植入(材料生物相容度、降解与细胞功能的同步化、营养支持、血管生成等) 检测和管理 临床验证 产业化;种子细胞：;体外途径：从病人体内获取细胞，体外培养并导入目的基因后，重新输入患者体内。 体内途径：直接将基因或携带目的基因的经改造的病毒导入人体患病组织中。;选择安全、无毒、容易穿过细胞膜的基因载体，将治疗基因导入细胞内。 理想载体的条件： 易获得高滴度的纯品； 能稳定、高效地转染体内非增殖状态的细胞； 可以长期、稳定地表达外源基因而不会引起细胞毒性、感染或免疫应答； 能特异地识别靶组织，在其中表达外源基因；;西班牙马德里自治大学博尔纳德教授和丹麦欧登塞大学医院布瑞恩斯(Cancer Res,2005): 体外培育人体间充质干细胞6-8周是安全的； 超过4-5个月，这种干细胞会发生自发转化； 体外培养8个月、分裂了90-140代的人体间充质干细胞移植至动物体内后，发现“最老的”细胞发生了癌变。;原因——端粒酶 端粒酶有阻止端粒随细胞分裂而逐渐缩短的作用，从而稳定染色体的末端，在保持细胞“永生”性中起重要作用。干细胞的端粒酶基因活化，最