bFGF对肝纱固化的去细胞血管支架再细胞化作用的-研究.pdfVIP

5 ·论文· bFGF对肝素固化的去细胞血管支架再细胞化 作用的研究 刖 吾 冠状动脉粥样硬化疾病是世界范围内危害人类健康的主要疾病，病情严重的 患者需要进行血管旁路移植手术，即通常所说的“冠脉搭桥，就血管材料而言，术 中所应用的移植材料一般取自自身，如大隐静脉、胃小弯动脉、胸廓内动脉、桡动 脉等【l川，目前最为常用的移植材料是自身大隐静脉【5】，但一般搭桥手术的患者，大多 需要3支或3支以上的移植血管，部分患者甚至需要再次手术，因此临床对血管移植 物的需求很大，常存在“供不应求的状况；虽然动脉材料的远期通畅率明显优于 静脉材料，但在某些特殊情况下，如肢体疾病、动脉粥样硬化、截肢等原因，患者的 自身血管材料受到限制，且全动脉化搭桥术创伤较大，手术时间长，无法完全满足临 床治疗的需要。因此，本课题旨在研究出一种外源性的，适合用于冠脉搭桥等术式的 小口径血管。 脱细胞血管材料是将天然血管经过特殊处理将实质细胞去除，保留相对完整 的细胞外骨架结构，抗原性无或低、与受体细胞有极佳的相容性[61，以及含有促进细 胞生长特殊生物信息的生物性细胞外基质[71，成为血管移植的理想材料【引。尤其是 同种脱细胞血管支架材料，减少了种间的相互感染，更易于被内皮细胞黏附和以后 的再塑，同时也不会降解为潜在的可能会对身体有害的物质，因此，脱细胞同种异体 血管支架已经被认为是除自体血管以外最有潜力的受损血管替代物【9】。 研究证明，内皮细胞的完整对防止血管内血栓的形成具有重要作用，移植血管 内覆内皮细胞可以有效的减少血栓的形成‘10n1。基于该事实，我们设想，如能在防止 移植血管内血栓形成的前提下，快速的促进移植血管的内皮化，势必可以减轻移植 血管内血栓形成，提高移植血管的通畅率。肝素的抗凝作用已被广泛认识，把肝素结 合在人工材料(冠状动脉支架、CPB管道、IABP管道等)的表面，证实肝素可以在 6 fibroblast· 局部缓慢持久地释放抗凝活性【12】。碱性成纤维细胞生长因子(basic growthfactor,bFGF)能调节血管壁细胞(如：内皮细胞和平滑肌细胞)的生长和功能， 与移植血管的内皮化密切相关，此外，该生长因子能结合肝素或硫酸肝烈13】，共同作 用促进去细胞血管支架的再内皮化，完成去细胞血管支架的重塑。 因此，本实验通过模拟冠状动脉旁路移植术建立兔异体颈动脉移植模型，对去 细胞预载bFGF的兔颈动脉进行体内研究，然后通过生物化学方法、免疫化学检查 和电镜等手段观察移植血管材料的内皮化程度，评价其作为冠状动脉旁路移植术 重异体血管来源的可行性。 材料与方法 一、主要试剂和仪器 (一)主要试剂 (1)PBS缓冲液(0．Olmmoi／L，PH7．4) NaCl8．0克 1．44克 Na2HP04 KCL0．2克 0．2克 Kid2P04 20min后备用。 (2)Dnase酶和RNase酶(Genview公司) 用PBS液分别稀释配成30u／ml和0．3mg／ml的浓度的溶液 (3)TritonX-100(夏斯生物公司) 用PBS液稀释配成O．5％的溶液，过滤除菌后备用 (4)胰蛋白酶(上海生工) 用PBS液稀释配成0．025％的溶液，过滤除菌后备用 (5)乙二胺四乙酸(EDTA)(上海生工) 用PBS液稀释配成0．02％的溶液，过滤除菌后备用 (6)青霉素和链霉素(上海生工) 7 05)d,鼠抗兔因子单克隆抗体(Gib‘zo公司) 、(二)主要仪器 (1)水浴恒温振荡器(江苏太仓实验设备厂) (2)AG-245电子天平(MettlerTolledo公司) O)LKB—IlI型超薄切片机(瑞典)