唐山地区HBV感染者IL―6 基因启动子区多态性剖析.docVIP

唐山地区HBV感染者IL―6 基因启动子区多态性剖析 　　摘要： 目的： 探讨唐山地区汉族成年人群外周血白细胞IL-6基因的多态现象与 HBV感染的关系。方法： 采用成组病例-对照研究的方法收集179例HBV感染者和120例健康对照，对其基因型进行比较。采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性（PCR-RFLP）方法检测IL-6 -572，-597基因位点的基因型。结果： IL-6 -597仅见野生型纯合子，未见突变型，故在基因多态性的研究中，其不具有进一步分析的价值，而-572位点发现三种基因型（CC、CG和GG），但对其基因型和等位基因在两组中的分布进行χ2检验，差异无统计学意义，但在调整了影响因素的作用后，IL-6 -572GG基因型发生HBV感染的危险性较CC基因型升高，OR值为2.426（1.080～5.452），故认为IL-6 -572与HBV感染有关。结论：IL-6 -572可能与HBV感染有关，IL-6 -572GG基因型可能为HBV感染的危险因素。 　　关键词：HBV感染，IL-6， 基因多态性 　　目前HBV感染仍是全世界所关注的公共卫生问题。HBV感染可导致慢性乙肝，肝硬化、肝癌等不良结局，严重威胁人类健康，估计每年大约有60万人死于HBV感染所导致的疾病[1]。大量研究证实细胞因子介导的免疫反应直接参与HBV感染的全过程，IL-6作为一类重要的细胞因子，它在HBV感染者的免疫反应中扮演重要角色，已有研究证实IL-6启动子区基因多态性与慢性HCV感染及感染结局有关[2]，然而，IL-6启动子区基因多态性是否与HBV感染有关仍需进一步研究。故本次试验通过检测IL-6 -572，-597位点基因编码，探讨其多态性与HBV感染的关系。 　　1对象与方法 　　1.1研究对象 　　收集2010年5月～2012年4月于唐山市传染病医院及开滦医院收治的汉族成人（年龄≥18岁）HBV感染患者179例。其中男性占132/179，其平均年龄为35.42±12.16；研究对象均符合2010年中华医学会肝病与感染病分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南》诊断标准。排除所有病例除外重叠其他肝炎病毒感染且无明显其它引起肝功能异常的原因，以及心血管疾病和感染性疾病。同时收集开滦医院参加健康体检的人群120例为对照，男性占83/120，其平均年龄为37.59±10.48。所有入选人群肝功能正常，肝炎病毒标志物均阴性。且无各种心血管疾病和感染性疾病。 　　1.2 流行病学调查 依据有关文献设计调查表，在征得所有病例知情同意后进行问卷调查，包括一般情况（（年龄、性别、身高、体重、职业）、饮酒情况、医疗保险、乙型肝炎家族史、乙型肝炎患者接触史等。 　　1.3 基因型检测方法 　　采集空腹静脉3ml，乙二胺四乙酸抗凝，采用盐析法提取人外周血白细胞基因组DNA。以寡核苷酸引物5’-GAGACGCCTTGAAGTAACTG-3’ 为上游引物，5’-AAGTGCAGCTTAGGTCGT -3’为下游引物序列，引物均由北京赛百盛公司合成。采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性方法检测，PCR体系：模板DNA1μl，上下游引物（10Um/L）各1μl，dNTP （5mmol/ L） 1μl，TaqDNA聚合梅（10u/ul） 0.2μl，mgCl2（25mmol） 2μl，10倍反应缓冲2μl，加双蒸水至20μl。PCR反应条件：95℃预变性3 min， 然后94℃变性60s，49℃退火1 min，72℃延伸1 min，5个循环；之后94℃变性30s， 49℃退火30s，72℃延伸30 s，28个循环；终末延伸72℃ 7 min。分别以限制性内切酶Bsrb I（-572）和Fok I（-597）进行消化（37℃，24h）。根据片断大小（与标准分子量对照）及条带数确定其基因型。-597位点GG基因型：438bp， GA基因型：438bp、 351bp、87bp，AA基因型：351bp、87bp；而-572位点：GG基因型有376bp，62bp两条片断，CG基因型有438bp ， 376bp，62bp三条片断，CC基因型仅有438bp一条片断。 　　1.3数据处理 　　应用Excel建立数据库，应用SPSS13.0统计软件对计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验。对基因型频率和各潜在危险因素与HBV感染的关系采用多因素非条件Logistic回归分析，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1 一般情况 　　对HBV感染组和健康对照组的一般情况（体质指数、饮酒、职业、医疗保险、家族史）进行比较（见表1），结果发现①职业②医疗保险③家族史在两组中分布差异有统计学意义，（P0.05。） 　　2.2 HBV感染组和健康对照组基