实验一糕点中菌落总数测定.pptVIP

1、了解细菌总数检验的意义。 2、掌握样品稀释处理的方法和菌落总数计数的方法 3、掌握食品细菌总数的测定报告方式。 4、熟练无菌操作技术。 实验一 糕点中菌落总数的测定 一、实验目的 1、电热恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、托盘天平、电炉、吸管、广口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、试管、试管架、酒精灯、均质器或乳钵、灭菌刀或剪刀、灭菌镊子、75%酒精棉球、玻璃蜡笔、登记薄 2、培养基和试剂：75%乙醇、生理盐水(蒸馏水）、营养琼脂培养基。 二、实验材料 菌落总数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等)，所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。 本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 (一）最先准备的器材（清洗、烘干、包扎、灭菌）*8 规格名称 数量 用途 1、500ml三角瓶 1个 稀释样品（配制生理盐水） 2、250ml三角瓶 1个 配制营养琼脂 3、18×180mm试管 5支 稀释样品（9ml） 4、1ml移液管 5 支 5、直径为90mm平皿 8套 倒营养平板 6、250ml量筒 1支 7、玻璃珠：直径约5mm （二）应灭菌、消毒的器材 剪刀1把 不锈钢药匙1把 称量纸：适量 酒精消毒的器材：吸耳球1个，滴管胶头5只 （三）应制备的培养基 培养基 总量 所用容器 蒸馏水 1瓶 225ml/瓶 500ml三角瓶 平板计数琼脂 1瓶 150ml/瓶 250ml三角瓶 稀释水： 每组5支 9ml/支 18×180mm试管 A.1 平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基 A.1.1 成分 胰蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 2.5 g 葡萄糖 1.0 g 琼 脂 15.0 g 蒸馏水 1000 mL pH 7.0±0.2 A.1.2 制法 将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121 ℃高压灭菌15 min。 1、检验程序 菌落总数检验程序： 检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入460C适量营养琼脂→菌落数→报告 三、实验方法 2、检样稀释及培养 （1）以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎以后，放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~100000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。 （2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。 （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。 注意： ①加入检样液时，吸管尖端不要触及瓶口或试管口外部，也不得触及管内稀释液，并将吸管内的液体沿管壁小心流加入，以免增加检液。 ②吸管插入检样液内取样稀释时，插入深度要达2.5cm以上,调整时应使管尖与容器内紧贴 ③每递增稀释一次，即换用另一支1ml灭菌吸管 （4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 （5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培养基[可放置在（（46±1）0C）水浴锅内保温]注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（36±1）0C恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1g（1mL）样品所含菌落总数。 ①培养基不能触及平皿口边沿