家族性肌萎缩侧索硬化模型SOD1G93A转基因小鼠认智功能-研究.pdf

中文摘要 英文摘要 研究论文 —1L—jL． 日|J舌 材料 结果 附图 附表 讨论 结论 参考 综述肌 致谢…… 个人简历 中文摘要 家族性肌萎缩侧索硬化模型 SODl∞弘转基因小鼠认知功能研究 摘 要 LateralSclerosis 目的：肌萎缩侧索硬化(Amyotropllic ALS)是一种 神经系统的变性疾病，一般认为ALS选择性损伤大脑皮层大锥体细胞及 脑干运动神经核、脊髓前角的运动神经元，造成了脑和脊髓运动神经元的 丢失，具体机制不明。然而在临床工作中发现ALS患者除运动系统症状 外，部分伴有认知功能损害、感觉障碍、眼球运动障碍、自主神经功能障 碍等运动系统外症状。因此，探讨ALS是否呈多系统累及，是我们需要 关注的问题之一。 ALS伴发的运动系统损害外症状中，以认知功能损害最为常见，而 海马是公认的与认知功能有关的结构。在ALS患者的尸检研究中发现患 者海马区可发现泛素阳性胞质内圆形、椭圆形包涵体，支持ALS累及非 运动系统，并可能与临床上常见的认知功能损害有关。 泛素系统(UPS)主要由泛素活化酶、泛素结合酶、泛素蛋白连接酶 和26S蛋白酶体组成。其广泛存在于真核生物中，降解80％以上的细胞 内错误折叠蛋白或其他突变蛋白，是精细的特异性的蛋白质降解系统，是 体内重要的细胞调控体系。研究认为泛素蛋白酶体降解通路失调可导致异 常蛋白在细胞内积聚，并进一步引起细胞功能紊乱及变性。因此，泛素蛋 白在海马区的表达异常可导致底物蛋白在细胞中异常聚集，形成胞质内包 涵体，损害海马神经元细胞的正常功能，导致认知功能的损害。 本实验应用家族型肌萎缩侧索硬化动物模型一SODlG93A转基因小 鼠，通过对动物的行为学改变及海马区病理学变化的研究，探讨ALS是 否存在认知功能的损害及认知功能的损害与泛素海马区异常表达的相关 性，为临床研究提供理论基础。 方法： 1实验动物模型的建立 由B6S儿2 雌鼠(购自美国JackSon 中文摘要 增，PCR产物经1．5％琼脂糖凝胶电泳后，，在长波紫外光下观察条带结果， 鉴定SODl(+)小鼠及SODl(．)同窝对照小鼠。 2动物分组 Y型迷宫预选对电击反应较敏感，逃避反应迅速的60只小鼠 3SODlG93A转基因小鼠评分标准 et 应用VerCelli 每周对动物的全身状态进行评分，1～5分定义如下： 5：健康，不伴任何瘫痪症状 4：轻微步态不稳及后肢瘫痪症状 3：明显瘫痪及步态不稳 2：后肢完全性瘫痪，动物仅靠前肢爬行 l：后肢完全性瘫痪，动物主要呈侧卧位，和／或翻转后不能翻身或体 重下降超过初始体重的20％。 4跳台试验 试验分两天进行：第一天，训练前先将不同病程的SODl鲫A转基因 清洁小鼠放入反应箱内自由活动3min，熟悉环境。然后将动物置于铜栅 min 上，接通铜栅电源，通以36V交流电。动物受到电击，观察记录动物5 内第一次找到平台的时间(为学习反应时间)及5min内跳下平台的次数 (为学习错误次数)，学习反应时间及学习错误次数用以评价小鼠