细胞化学标记技术-生物探索.PPT

组织化学技术: 应用化学、物理、生物化学、免疫学或分子生物 学的原理和技术与组织学相结合而产生的技术，能在 组织切片定性、定位地显示某种物质的存在与否以及 分布状态。还可进一步用显微分光光度计或图象分析 仪测定光镜切片中该物质反应的强度，获得定量的信 息。 细胞化学技术: 应用组织化学技术于游离细胞的样品(如细胞涂 片)，则称细胞化学技术。 一 组织细胞化学染色 组织细胞化学染色是将形态和功能相结合的细胞科学。它是在保持完整的细胞形态和细胞结构的前提下, 运用化学反应将被检细胞内的各类化学成分和细胞结构 及生理活性物质原位地显示。因而对于探索化学成分、 生理功能、新陈代谢及细胞生理和病理改变有着重要的 意义。 组织细胞染色的范围一般可分为：蛋白质类（氨基 酸)、核酸类、多糖类、脂类、盐类或金属类，采用的 方法通常为化学结合物理溶解显示及酶-底物反应。 组织细胞化学染色方法分门别类有许多种,结果的显 示也不尽相同,有时即使是检测同一物质,因采取的方法 不同,其结果有可能存在一定的偏差,另一些是由于方法 学上本身的缺陷,其结果也可能产生误差,所以我们应注 意选择结果稳定、方法简便(操作步骤越繁复,结果出现 误差的可能性就越多),阳性显示明显的细胞化学染色方 法如果条件允许可与细胞免疫化学、细胞遗传学、分子 生物学等相结合,使细胞化学染色发挥最大、最准确的 作用。 常用组织细胞化学染色 过氧化物酶 peroxidase ,(POX) 1.原理 血细胞中的POX能分解H2O2而释放出新生态氧，后者 可使联苯胺氧化成联苯胺蓝沉淀于细胞质酶活力处。 2.正常阳性细胞: ①. 中性粒细胞呈均匀颗粒状蓝黑色阳性。 ②. 嗜酸性粒细胞呈均匀粗大颗粒状蓝色阳性。 ③. 单核细胞呈弥散细颗粒状蓝色阳性。 过碘酸一雪夫反应?periodic acid Schiff reaction ,PAS 此试验中能被过碘酸-雪夫反应呈阳性的多糖类物 质有糖原、粘多糖、糖蛋白、糖脂、还包括一些磷脂 类物质等，因此PAS阳性不能简单地就表明有糖原的存 在，只是在对血细胞的组织化学研究中通常习惯于将 PAS阳性认同于糖原。 PAS染色虽然不完全代表糖原，但在血液系统疾病特 别在各类型急性白血病中却有相当大的应用价值。PAS 染色若结合其他化学染色和细胞免疫表型检测可对部 分疾病的诊断和鉴别诊断提供一定的价值。 1.原 理 过碘酸氧化多糖类中的乙二醇使之成为双醛基，后 者与无色品红结合形成紫红色化合物。定位于含多糖 类的细胞质内。多糖类物质含量决定了色泽的深浅。 2.参考范围:（正常阳性细胞） ①粒细胞系—原粒细胞多呈阴性,通常随细胞不断成 熟阳性反应由弱渐强,至细胞完全成熟后达到最大 强度。其中中性粒细胞呈胞浆内弥散状红色阳性, 嗜酸粒细胞S颗粒之间的胞浆呈红色阳性,嗜碱粒 细胞呈大小不一的颗粒状紫红色阳性。 ② 红细胞系— 幼红细胞及红细胞均呈阴性。 ③ 巨核细胞系— 从原始阶段到血小板均呈阳性。 ④ 淋巴细胞系— 大多数淋巴细胞呈阴性，小部分 淋巴细胞成阳性。 ⑤ 单核细胞系— 原始阶段呈阴性，幼稚阶段以后 可见浆内呈弥散细小颗粒状红色阳性。 ⑥ 浆细胞系— 大多数浆细胞呈阴性，小部分浆细 胞呈阳性。 中性粒细胞碱性磷酸酶neutrophil alkaline phosphatase ,(NAP) 1.原理 细胞内碱性磷酸酶在碱性环境下水解磷酸萘酚，使 之释放出萘酚，后者与重氮盐偶联形成有色沉淀物。 定位于酶活性所在处。 2.参考范围 ： 中性粒细胞碱性磷酸酶活力正常范围2%～56%, 积分 4～80 分 /100个中性粒细胞 二 组织细胞免疫化学标记技术 组织细胞免疫化学是细胞化学吸收了免疫学的理论和技术而发展起来的一门重要方法学.在现代医学领域中被广泛应用.尤其在组织细胞学中该技术的应用是微观世界形态学研究从单一的形态学描述上升到结构、功能和代谢为一体的动态观察。并可对细胞的属性、分化阶段和变异进行鉴别，有助于临床疾病的诊断。 组织细胞免疫标记技术的方法学建立至今仅为短短30年左右的时间，但其发展异常迅速，检测方法可多达20多种以上。其基本原理是将组织和细胞作为抗原，与其相应的特异抗体产生抗原－抗体反应，并借助荧光色素、酶、胶体金、铁蛋白等显示系统，在被测组织和细胞所相应的位置显示出来。由于抗原－抗体系统具有高度的特异性和敏感性，能够将细胞形态学和功能代谢紧密的结合起来，进行观察和分析。 目前实验室常用的方法有免疫荧光法，PAP法，ABC法、IGSS法等10大类。但由于各种方法均有其特性和检测适应范