肝素酶CTL表位多抗原肽MAP负载的树突状细胞-第三军医大学学报.DOCVIP

PAGE 肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞表位多抗原肽负载的树突状细胞疫 苗体外抗肿瘤免疫效应研究 王国珍，汤旭东，吴玉云，李 宁，李长珠，陈 陵，房殿春，杨仕明 （400038重庆，第三军医大学西南医院全军消化病研究所） [摘要]目的 研究肝素酶（heparanase，Hpa）细胞毒T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）表位多抗原肽（multiple antigen peptides，MAP）疫苗能否诱导更强的Hpa特异性CTL反应，为肝素酶多抗原肽疫苗的临床应用提供理论依据。方法 HLA-A2.1限制性肝素酶CTL表位多抗原肽负载正常人外周血来源（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）树突状细胞（dendritic cell，DC），诱导CTL，采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应；采用ELISPOT实验检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果 肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的CTL对Hpa阳性且HLA-A2.1匹配的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有明显的杀伤效应，且其杀伤效应强于相应的单肽，在最大效应细胞/靶靶细胞(Effector/Target, E/T) 时高出率均大于16%；其对HLA-A2.1阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应，但是对MCF-7/Hpa乳腺癌细胞和HepG2/HLA-A2肝癌细胞具有明显的杀伤效应，且其杀伤效应强于相应的单肽，在最大E/T时高出率均大于18%；其对自体淋巴细胞和DC 不具有杀伤效应。另一方面人肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的IFN-γ分泌水平强于相应的单肽。结论 肝素酶CTL表位MAP疫苗能激发较相应单肽更强的特异性和非特异性抗肿瘤效应，这种肝素酶CTL表位MAP疫苗具有广谱、高效、特异、安全的优点，为其临床应用提供了理论依据。 [关键词]肝素酶；CTL表位；多抗原肽；树突状细胞；肿瘤疫苗 Heparanase CTL epitope MAP-pulsed DCs elicit immune responses against various tumors in vitro WANG Guo-zhen，TANG Xudong，WU Yuyun， LI Nin， LI Changzhu，CHEN ling， FANG Dianchun，YANG Shiming（Institute of Gastoenterology， Southwest Hospital， The Third Miltary Medical University， Chongqing， 400038） [ABSTRACT] Objective The present paper is designed to study whether the heparanase multiple antigen peptide could elicit stronger heparanase-specific cytotoxic T lymphocytes （CTLs） against various tumors in vitro and provide theoretical evidence for their clinical application. Methods Dendritic cells （DCs） were pulsed with HLA-A2.1-restricted multiple antigen peptide of heparanase to induce heparanase-specific CTLs. Specific lysis to various tumor cell lines was examined by a 4 h standard 51Cr release assay. We use ELISPOT to test IFN-γ–producing of the effector cell. Results comparing to Heparanase epitope peptide，Heparanase multiple antigen peptide could elicit stronger specific lysis to gastric cancer cells KATO-III， osteogenic sarcoma cells U2OS and colonic cancer cells SW480， which were heparanase and HLA-A2.1po