医学常见的微柱凝胶检测技术.ppt

微柱凝胶检测技术在输血前相容性试验中的应用 主要内容 一、血凝试验技术发展 二、在血型检测中的应用 三、在抗体筛查中的应用 四、在交叉配血中的应用 一、血凝试验技术发展 血凝实验：是指抗体和红细胞在液体介质中发生的肉眼可见的凝集反应。根据介质的不同可以分为下列5种 盐水法 凝聚胺法 酶介质凝集试验 试管抗人球蛋白法 MGIA- Coombs’试验（微柱凝胶） 盐水介质法 是最早最简单的方法。 悬浮于盐水介质中的红细胞与相应抗体分子结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集。 主要检测IgM类抗体（ABO系统、抗E）。 盐水介质法 盐水介质法 结果分析：先观察有无溶血、再观察有无凝。 要求：细胞浓度2～5%、血清与细胞比例、反应温度、弱凝集分析 优点：简便、快捷、直观、成本低。 缺点： 不能发现不完全抗体 人为因素影响大 聚凝胺试验 原理：MPT法是利用阴离子溶液和聚凝胺减少 红细胞表面的阳离子层及Zeta电位，促 进IgG与红细胞的结合，缩短红细胞之间 的距离而使红细胞凝集。 聚凝胺试验 聚凝胺试验 优点 简便快捷，可用于某些不完全抗体检测。 缺点 它受冷凝集、肝素等因素的影响较大 灵敏度低，对抗-K漏检 人为影响因素大 振摇的力度和解聚的时间需要严格掌握，要求轻轻转动试管并同时观察结果，观察时间不应超过1 min，弱凝集用力振摇或放置时间稍长便可能消失。 试验结果需在显微镜下观察，故对操作者的技术要求较高，也增加了结果判断的不确定性。 聚凝胺试验 凝聚胺技术在交叉配血中具有快速检出 IgG 抗体能力，但近年来随着对临床无效输血的深入研究发现，凝聚胺试剂对弱的、效价低的 Rh 血型系统的抗体有漏检的情况，且不同厂家、不同批号的凝聚胺试剂在抗体的检出率均存在一定的差异。 酶介质凝集试验 原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电荷，使红细胞相互排斥。蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的距离，使IgG分子能与有相应抗原的红细胞产生凝集。 常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花果酶。 酶介质凝集试验 优点 可以增强一些抗原抗体系统的反应活性 Rh和Kidd系统最明显。 缺点 会破坏一些抗原的结构(M、N、Fya、Fyb) 酶液批次不同，孵育时间均不同 操作复杂 少数人对酶液过敏 Coombs’试验 人红细胞表面抗原与不完全抗体结合（常是IgG类抗体），不完全抗体致敏红细胞，由于该不完全抗体分子质量小，而且两个Fab段扩张角度小，不能使相邻红细胞桥联，红细胞仍处于分散状态，不出现肉眼可见的红细胞凝集现象。在反应体系中，加入针对该抗体的抗体，即抗-抗体，该抗-抗体Fab段结合相邻红细胞上不完全抗体Fc段，出现肉眼可见的红细胞凝集现象，该抗-抗体即称之为抗人球蛋白抗体。 Coombs’试验 Coombs’试验 Coombs’试验是理论上最明确、最准确的方法，是国际公认的金标准。但是由于其繁琐的操作，又不能同时对多份标本检测，只能将该试验用在少数标本的确定中，很难临床常规开展。 微柱凝胶检测技术 原理 应用 ABO血型检测； Rh血型抗原检测； 不规则抗体筛检； 交叉配血； HDN检测； 血小板抗体筛检； 血小板交叉配血。 特点及优点 1.简单，不需洗涤，对阴性结果不需确证试验，解决了 Coombs试验因为程序复杂费时等原因未能在临床常规应用问题。 2.使不完全抗体检测理论“金标准”成为临床的“金标准”。 3.多份标本一次离心出结果，有利于临床大量标本检测。 4.另外还具备准确、敏感、标本用量少、结果保存时间长、易于标准化、操作更安全等优点。 特点及优点 结果清晰、易于判读，准确度、敏感性高，标准化加样、规范化操作，排除了传统方法人为因素的干扰。 不足 较传统方法成本稍高； 抗体筛查、配血须经孵育过程，耗时较传统方法稍长，不适用于紧急输血。 二、在血型检测中的应用 二、在血型检测中的应用 Rh血型抗原检测 进行D、C、c、E、e五种主要抗原检测，达到最大相容性输血。 二、在血型检测中的应用 注意事项： 要求标准化加样、规范化操作，可排出了传统方法中人 为因素的影响； 按要求准备标本，防止溶血、纤维蛋白等影响结果； 按要求准备试剂卡，防止由于试剂卡问题影响结果。 二、在血型检测中的应用 常见问题分析及处理： 阴性对照孔假阳性： 首先观察标本，是否有溶血、细胞黏连等情况；了解临床信息，是否可能有自身凝集、冷凝集等情况；试剂卡是否平衡； 样本细胞进行洗涤、必要时可以进行温盐水洗涤，重新准备试剂卡，按标准操作流程重