Tll样受体2、9mRNA在感染性早产患者外周血单个核细胞的表达及意义.docVIP

Toll样受体2、9mRNA在感染性早产患者外周血单个核细胞的表达及意义 董生凤1罗艳2 王豫黔2 （1遵义医学院附属医院妇产科贵州遵义563000） （2遵义医学院第五附属（珠海）医院妇产科广东珠海519000） 屮图分类号】R722.6 】A 】1672-5085 （2013） 27-0067-02 】目的探讨感染性早产患者外周血单个核细胞Toll样受体2、9mRNA 的表达。方法收集31例早产患者部分胎盘胎膜组织行病理检查，根据病检分 为早产感染组（17例）和早产非感染组（14例），门诊进行孕检的正常孕妇作为正常 对照组（10例）。（1）采用酶联免疫吸附法测定血清屮的IL-6水平；（2）应用实时定 量PCR技术检测早产患者和正常对照组孕妇外周血单个核细胞TLR2、9的mRNA 表达水平。结果（1） TLR2mRNA在早产感染组患者外周血单个核细胞的表达水 平显著高于早产非感染组和正常对照组（P0.05）;而TLR9mRNA在早产感染组、 早产非感染组和正常对照组外周血单个核细胞的表达水平无差异（P0.05）； （2） 早产感染组患者血清屮IL-6水平明显高于早产非感染组和正常对照组，差异有显 著性（P0.05）,但早产非感染组和正常对照组血清屮IL-6水平比较，差异无显 著性（P〉0.05; （3）感染性早产患者外周血TLR2mRNA的表达水平与血淸屮IL-6 水平呈正相关（r=0.778, Plt;0.01）而TLR9mRNA的表达与IL-6不存在相关关系 （r=0.0355 , P= 0.162）。结论感染性早产患者外周血单个核细胞表面TLR2mRNA 表达增强，提示TLR2参与了感染性早产的发生发展过程，其与血清中IL-6水平 成正相关，可作为早期预测早产宫内感染的指标。 关键词】Toll样受体早产宫内感染 早产是妊娠期常见的并发症之一，对围产儿的危害很大，全球发生率一 直保持在5%-15%,其屮由感染引起的早产在临床上占到40%左右[1],感染因素 在早产屮的作用越来越受到人们的重视。TLR2是一种介导先天性免疫的特异受 体，它广泛参与炎症反应和免疫应答，Kim[2]等通过免疫组化方法对胎盘组织的 研宄发现，早产尤其是合并妊娠绒毛膜羊膜炎时TLR2表达量明显增加，提示TLR2 可能通过炎症反应或是诱导细胞凋亡参与早产分娩发动。 TLR9己经被证实是哺乳类动物细胞识别细菌DNA中免疫刺激序列CpG 的受体，从而激活哺乳动物细胞天然免疫机制的发现,具右重要的生物学意义与成 用价值起作用[3】。本研究通过检测TLR2、9mRNA在早产患者外周血单个核细胞 的表达，探讨其与感染性早产的关系及在预测早产中的价值。 1资料和方法 1.1病例选择 选择2007年5月至2007年10月在我院产科分娩的早产孕妇31例（孕 周28 — 36周+6）,其中胎膜早破17例。按病理学检查有无绒毛膜羊膜炎分为两 组：早产感染组（即冇绒毛膜羊膜炎）17例；早产非感染组14例（即无绒毛膜 羊膜炎）；另选取同期在我院围产保健门诊定期检查的同孕周正常孕妇（28 — 36 周+6） 10例作为对照组。 1.1.1纳入标准凡符合以下标准者纳入本研究，孕周明确、单胎、分 娩孕周为28-36+6周和（或）有胎膜早破、生殖泌尿道感染因素存在。经胎盘胎 膜组织病理学检查有无绒毛膜羊膜炎再分为旱产感染组（17例），早产非感染组 （14例）。对照组：门诊孕检孕周明确、单胎、无宫缩、追踪至37周内未分娩。 1.1.2排除范围病理妊娠如：妊娠期高血压疾病、妊娠期肝内胆汁淤 积症、前置胎盘、胎盘早剥、合并有糖尿病、甲亢等内、外科疾病。 1.1.3组织学绒毛膜羊膜炎的诊断标准在绒毛膜及羊膜组织中，中性 粒细胞浸润每高倍镜视野〉5个，即为存在感染，可诊断为绒毛膜羊膜炎。绒毛膜 羊膜炎往往伴发急性坏死性蜕膜炎，而且蜕膜炎的严重程度常超过绒毛膜羊膜炎 [4】。 1.2引物、试剂及仪器TLR2、9及beta;-actin引物由大连TakaRa生物 工程公司合成。淋巴细胞分离液购自美国Sigma公司，总RNA提取液Trizol购于 美国Gibco公司，RT-PCR所用酶及反应试剂盒购于大连TakaRa生物工程公司。 实吋荧光定量PCR仪为美国Bio-Rad公司生产，凝胶成像图像分析仪为美国 Syngene公司生产，紫外分光光度计为美国Beckman公司生产。 1.3方法 1.3.1外周血单个核细胞（PBMCs）分离纯化抽取外周静脉血4ml, 以lml肝素抗凝，加入等量的1640液，用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细 胞，重悬在含10%胎牛血清的完全RPMI 1640中，置一8CTC冰箱保存。 1.3.2细胞总RNA制备及逆转录cDNA采用Trizol 一步法总RNA提