《微生物技术大实验期末论文报告-苯酚降解菌的富集筛选及其降解条件研究》-毕业论文.docVIP

微生物技术大实验期末论文报告 PAGE \* MERGEFORMAT 1 苯酚降解菌的富集筛选及其降解条件研究 摘要：［目的］从炼油厂的活性污泥中分离高效苯酚降解菌，对其进行形态学鉴定，并研究其特性，为含酚废水的处理及环保工程菌株构建奠定基础，具有一定的理论和实际应用价值。［方法］从南京金陵石化炼油厂的活性污泥中筛选、驯化得到1 株高效苯酚降解菌株P4。通过形态学对其进行鉴定。最后，对P4的苯酚降解特性进行研究。［结果］P4为革兰氏阴性球菌，最适降解苯酚的温度为28℃，最适pH 为5.5;36h 内对300mg/L的无机培养液苯酚降解率达到56.6%。［结论］P4 具有较强的适应能力和苯酚降解能力，可用于高浓度含酚废水的生物处理，有较高的研究及应用前景。 关键词:苯酚降解菌; 筛选; 驯化; 最佳降解条件 苯酚是有机合成的重要原料，是造纸、炼焦、炼油、塑料、农药和医药合成等行业生产的原料或中间体[1]，大量用于制造酚醛树脂以及其他高分子材料、药物、燃料和炸药等。随着树脂、化工和高分子材料等企业对苯酚需求量的日益增加，各企业所排放的含苯酚废水量也日益增加[2]。由于苯酚是一种原型质毒物，具有很强的毒性，对生态环境和人体健康构成巨大威胁[3, 4]。在许多国家，苯酚已被环保部门列入优先控制污染物的黑名单之中[5, 6]。 结合国标GB8978-1996的实施，有关工作人员将每升1000毫克以上的含酚废水进行回收处理；每升1000毫克以下的含酚废水浓缩后回收处理；每升300毫克以下的含酚废水才允许采用某种方法清除废水中苯酚，处理达标后排放。清除工业废水中苯酚的方法主要分为三大类：物理处理方法、高级氧化处理技术、生物治理方法。常用的物理处理方法包括吸附法、溶剂萃取法、膜萃取技术和膜蒸馏技术等；常用的高级氧化处理技术包括湿式催化氧化技术、光催化氧化技术和电催化氧化技术等；常用的生物治理方法包括活性污泥法、酶处理技术和固定化微生物技术等[7]。其中利用微生物降解苯酚不仅处理效率高、二次污染少，而且成本低廉、简单方便，因此生物降解法成为经济效益和环境效益俱佳的苯酚清除方法[8]。 在已有研究的基础上，本实验小组从南京金陵石化炼油厂中取得处理含酚废水的活性污泥，分离筛选出一株对苯酚具有高效降解能力的菌株，并对其进行了形态学和降解特性的研究，以期为含酚废水的处理及环保工程菌株构建奠定基础，具有重要的理论和实际应用价值。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1菌株 菌株来源于南京金陵石化炼油厂的活性污泥。 1.1.2培养基[9] （1）无机盐培养液: 90mg，0.8mg，0.9mg，400mg，6mg，600mg，溶解后加蒸馏水定容至1L，调节pH至7.0，121 ℃高压蒸汽灭菌20 min。 （2）富集培养基: 牛肉浸膏5g, 蛋白胨10g, 氯化钠5g, 琼脂18g, 溶解后加蒸馏水定容至1L,苯酚1000mg/L ，pH 7. 4?7. 6，121 ℃高压蒸汽灭菌20 min。 （3）琼脂平板( 分离培养基) : 在牛肉膏蛋白胨培养基的基础上加入不同浓度的苯酚。 （4）斜面培养基( 保存培养基) : 牛肉浸膏5g, 蛋白胨10g, 氯化钠5g, 琼脂18g, 溶解后加蒸馏水定容至1L，pH 7. 4?7. 6，121 ℃高压蒸汽灭菌20 min。 1.1.3试剂和溶液 酚标准液，2%4-氨基安替比林溶液，8%铁氰化钾溶液，氯仿，20%氨性氯化铵缓冲液。 1.1.4主要仪器 显微镜、721紫外分光光度计、摇床恒温培养箱、大容量高压灭菌锅、超净工作台等。 1.2 方法 1.2.1 苯酚降解菌的筛选驯化 富集培养：将新鲜的活性污泥在空气中曝气24h, 使其中微生物处于内源代谢阶段。取样品1g加入含100mL液体富集培养基的250mL锥形瓶中，在220r/min、30℃摇床培养24h。 筛选驯化[10]：采用逐级驯化方法。取污泥1g接入含苯酚500mg / L 100mL 的牛肉膏蛋白胨液体培养基中（做三个样）, 220r/min、30℃摇床培养72h后，取1mL驯化的菌液于1000mg/L的无机盐培养基中驯化。 分离纯化[10] [11]：采用梯度平板法分离。配制苯酚浓度为300mg/L、500mg/L、800mg/L、1000mg/L、1200mg/L作为惟一碳源的固体培养基。然后将纯化得到菌株分别划线培养在这5个梯度的培养基上。在30℃的生化培养箱中培养72h。从中筛选出耐受苯酚能力最强的菌株。分别以无菌操作琼脂平板划线分离, 每个样瓶划两个平板, 置30℃电热恒温箱中培养48h后, 挑取单一菌落在斜面上纯化，接种于牛肉膏斜面上, 同一条件继续培养48h后, 4℃冰箱保存。 1.2.2 菌种的观察与鉴别 观察并记录微生物的生