《第8节高效毛细管电泳理论基础》-课件.pptVIP

第三章 高效液相色谱分析 一、PHCE基本原理 basic principles of PHCE 二、电渗现象与电渗流 electroosmosis and electroosmotic flow 三、影响电渗流的因素 factors influenced electroosmosis 四、淌度 mobility 五、PHCE中的参数与关系式 parameters and relation in HPCE 六、影响分离效率的因素 factors influenced separation efficiency 一、高效毛细管电泳(HPCE)基本原理 basic principles of PHCE 二、电渗现象与电渗流 electroosmosis and electroosmotic flow 2.HPCE中的电渗现象与电渗流 3.HPCE中电渗流的大小与方向 HPCE中电渗流的方向 4. HPCE中电渗流的流形 5. HPCE中电渗流的作用 三、HPCE中影响电渗流的因素 factors influenced electroosmosis 3. 电解质溶液性质的影响 4. 温度的影响 5. 添加剂的影响 四、淌度 mobility 五、HPCE中的参数与关系式  parameters and relation in HPCE 3.分离度 六、影响分离效率的因素—区带展宽 factors influenced the efficiency—band broadening 3.焦耳热与温度梯度的影响 4.溶质与管壁间的相互作用 5.其他影响因素 请选择内容 * * 第八节高效毛细管电泳理论基础 high performance liquid chromatograph,HPLC basic theory of HPCE 电泳是指带电离子在电场中的定向移动，不同离子具有不同的迁移速度，迁移速度与哪些因素有关？ 当带电离子以速度ν 在电场中移动时，受到大小相等、方向相反的电场推动力和平动摩擦阻力的作用。 电场力：FE = qE 阻 力：F = fν 故： qE = fν q—离子所带的有效电荷； E —电场强度； ν—离子在电场中的迁移速度； f —平动摩擦系数 ( 对于球形离子： f =6πηγ；γ —离子的表观液态动力学半径；η —介质的粘度； ) 所以，迁移速度： （球形离子） 物质离子在电场中差速迁移是电泳分离的基础。 淌度μ ：单位电场强度下的平均电泳速度。 1.电渗流现象 当固体与液体接触时，固体表面由于某种原因带一种电荷，则因静电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界面形成双电层，二者之间存在电位差。 当液体两端施加电压时，就会发生液体相对于固体表面的移动，这种液体相对于固体表面的移动的现象叫电渗现象。 电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流（electroosmotic flow ，简称EOF）。 石英毛细管柱，内充液pH3时，表面电离成-SiO-,管内壁带负电荷，形成双电层。 在高电场的作用下，带正电荷的溶液表面及扩散层向阴极移动，由于这些阳离子实际上是溶剂化的，故将引起柱中的溶液整体向负极移动，速度ν电渗流。 电渗流的大小用电渗流速度ν电渗流表示，取决于电渗淌度μ和电场强度E。即 ν电渗流 = μ E 电渗淌度取决于电泳介质及双电层的Zeta电势，即 μ = ε0εξ ε0—真空介电常数；ε—介电常数；ξ—毛细管壁的Zeta电势。 ν电渗流 = ε0εξ E 实际电泳分析，可在实验测定相应参数后，按下式计算 ν电渗流 = Lef/teo Lef —毛细管有效长度； teo—电渗流标记物（中性物质）的迁移时间。 电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质： 内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极； 内表面带正负电荷，溶液带负电荷，电渗流流向阳极； 石英毛细管；带负电荷，电渗流流向阴极； 改变电渗流方向的方法： （1）毛细管改性 表面键合阳离子基团； （2）加电渗流反转剂 内充液中加入大量的阳离子表面活性剂，将使石英毛细管壁带正电荷，溶液表面带负电荷。电渗流流向阳极。 电荷均匀分布，整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动（谱带展宽很小）； 液相色谱中的溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为平均速度的2倍（引起谱带展宽较大）。 电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的5～7倍； 各种电性离子在毛细管柱中的迁移速