《第四章DNA的复制》-课件.ppt

核 酸－储存和传递遗传信息蛋白质－ 构成生物体的基本组分, 执行各种生理功能 DNA通过复制，将基因信息代代相传 DNA通过基因表达,决定了蛋白质的结构、功能 RNA参与DNA遗传信息的表达 RNA也可作为某些病毒遗传信息的载体 第二节 复制的原点、方向和方式 复制起点(origin) 是DNA复制所必需的一段特殊的DNA序列。细菌染色体、质粒和一些病毒的环形DNA分子通常具有比较明显的复制起点。 E.coli的ori C由两种类型的重复序列组成，一类是3个连续的13 bp序列，其中富含A-T；另一类是反向重复出现4次的9 bp序列。后者对于结合Dna A蛋白以起始DNA复制十分重要。 DNA分子复制时，在亲代双链分子一个特定区域内打开，随之以两股链为模板复制生成两个子代DNA双链分子。开始时，复制起始点呈现一叉形(或Y形)，称之为复制叉(replication fork)。 复制进行中，复制叉向前移动 DNA的半不连续续复制 因为DNA双螺旋的两条链是反向平行的，而DNA合成的方向只能是5?→3?，所以在DNA复制时，1条链的合成方向和复制叉的前进方向相同，可以连续复制，这条链叫前导链(1eading strand)；而另一条链的合成方向和复制叉的前进方向正好相反，不能连续复制，只能分成几个片段合成，故称为滞后链(lagging strand)，又称后随链。DNA的这种复制方式是半不连续复制(semidiscontinuous replication)。 因此，复制叉是不对称的。 滞后链片段又叫冈崎片段，它们合成后再连接起来。 DNA 复制的物质基础 底物(substrate): dATP, dGTP, dCTP, dTTP 聚合酶(polymerase)：依赖DNA的DNA聚合酶，简写为 DNA-pol 模板(template)： 解开成单链的DNA母链 引物(primer): 一小段RNA 其他的酶和蛋白质因子 在复制叉处进行复杂的DNA复制过程中，除DNA聚合酶外，需要许多相关的酶和蛋白因子参与： DNA旋转酶(gyrase,又称拓扑异构酶Ⅱ) 使DNA双股链在复制叉解开的解旋酶 在DNA复制前防止解开的DNA单链局部退火的DNA结合蛋白 合成RNA引物的酶 除去RNA引物的酶 使冈崎片段共价连接的DNA连接酶等酶与蛋白因子。 RNA引物 DNA链不能从头（de novo）合成。在DNA复制开始时必须先合成一小段RNA作为引物(primer)，从它的3’羟基开始合成DNA链，这一过程叫引发(priming)。待DNA链或片段合成结束，再将引物切除。 先导链 后随链 DNA聚合酶I和DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶水解为一大一小两个片段。较大的片段(68kD)称为Klenow片段，具有5?→3?的聚合酶活性和3?→5?外切酶活性。即具有合成/校正活性。 小片段(35kD)具有5?→3?外切酶活性，一次可切除少量的核苷酸，包括切除RNA引物。 5?→3?外切酶活性与合成/校正活性互相协调，使DNA聚合酶Ⅰ在体外具有从切口处起始复制的独特能力(其它DNA聚合酶均无此能力)。在双链DNA磷酸二酯键的断裂处，它能延伸3?末端。随着DNA 新片段的合成，DNA 聚合酶Ⅰ可置换双螺旋中已有的同源链，称为切口平移(Nick translation)。 DNA聚合酶Ⅱ是细胞正常生长中一种次要成分，可能与DNA聚合酶Ⅰ类似。 DNA聚合酶Ⅲ 在E.coli内实际承担DNA复制功能的主要是DNA聚合酶Ⅲ，它是一个大的酶复合物，是多亚基复合物构成的全酶(holoenzyme) 。 复制酶活性最初是通过在dnaE 基因座的致死突变发现的，它编码一个130kD 的α亚基，此亚基拥有DNA合成活性。 3?→5?外切核酸酶校对活性则在由dnaQ 编码的ε亚基中发现。 (二) 单链DNA结合蛋白（SSB） 复制过程中，复制叉在不断前进，复制叉前方的亲代DNA就需不断解链，为使复制能够顺利进行，就必须防止DNA单链的链间或链内局部退火并保证其完整性与伸展性，使单链DNA处于稳定的状态。承担上述任务的是DNA解旋酶(DNA helicase)和单链DNA结合蛋白(single-strand DNA binding protein，SSB)。 真核生物和T4噬菌体利用以ATP作为腺苷酰基的供体，而原核生物则以NAD＋为辅因子，催化的反应过程如下： (1)酶的活化 NAD＋或ATP中的腺苷酰基(AMP)与酶活性中心的赖氨酸残基的ε-NH2以磷酰胺键结合，形成共价中间体酶-AMP。 酶 ＋ NAD＋ (ATP)中酶