- 1、本文档共15页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
Western_blot_实验介绍及流程(PDF)
Western blot 实验介绍
及流程
Bio-rad垂直电泳、电转装置
• 目的与要求
掌握垂直电泳、电转的基本原理与操作步骤
• 培训内容
熟悉western-blot 与SDS的基本原理与实验流程
• 考核题目
Bio-rad垂直电泳、电转装置
• 电泳槽
玻璃板、梳子、加样校准架等
• 电转移槽
切胶板、黑白夹板、海绵垫等
• 电泳仪
用途:用于生物学实验中对特定目的蛋白质的分离,定
性及定量的检测分析,是Western-blot (蛋白免疫印
迹)实验中非常重要的部分。
Western blot 实验原理
• Western blot是利用已知的特异性抗体与抗原 (即组织
细胞中的目的蛋白 )能特异性结合的原理 ,通过化学反
应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂 (如酶、金
属离子、同位素 )显示一定的颜色或发光来对组织细胞
内目的蛋白定性及半定量的研究。
抗原 生物素标记 ECL发光试剂
的二抗
一抗
Western blot 检测蛋白表达实验流程
SDS-聚丙烯
提取总蛋白 蛋白浓度测定
酰胺凝胶电泳
一抗 封闭 转膜
洗涤 二抗 洗涤
分析 扫描 ECL检测
SDS电泳的基本原理
SDS电泳技术首先在1967年由Shapiro建立,1969年
由Weber和Osborn进一步完善。
SDS-聚丙烯酰胺(PAGE )凝胶电泳,是在PAGE凝胶中
引进SDS (十二烷基磺酸钠,含有大量带负电荷的SO32- ),
SDS能破坏蛋白质分子的二级、三级结构,在含有强还原
剂的溶液中可与蛋白质形成SDS-蛋白质复合物 (电泳样品
加入样品缓冲液后,要在沸水中煮3-5分钟)。由于结合大
量带负电荷的SDS ,好比蛋白质穿上带负电的 “外衣” ,
蛋白质本身带有的电荷则被掩盖了,从而起到消除各蛋白
质分子之间自身的电荷差异的作用,蛋白质在SDS
胶中的迁移率主要取决于其分子量的大小。
Western blot 实验流程
1 A protein sample is subjected to electrophoresis on an SDS-
polyacrylamide gel.
SDS电泳操作步骤
(1 )配制分离胶
注意:边配边平摇烧杯混匀,配好胶后迅速灌胶
(2 )灌分离胶
灌胶之上轻轻加一层水或正丁醇液
(3 )配制浓缩胶
注意:边配边平摇烧杯混匀,配好胶后迅速用滴管灌胶
(4 )灌浓缩胶
倒掉分离胶上的水或正丁醇之后,倒置吸净残留溶液,灌注浓缩胶,将梳子插好,胶凝固
您可能关注的文档
- 拜斗解厄全集.pdf.pdf
- 别墅物业:成都半山卫城高档别墅项目深度研究(决策)-49页.pdf
- 出口商品技术指南--玩具.doc
- 毕业论文(医学类)__含银抗菌敷料治疗糖尿病足溃疡疗效观察.pdf
- STM32 F1-F2-F4 比较.pdf
- SQL Server2005数据库实用教程 教学课件 ppt 作者 常军林 ppt 第七章.ppt
- 宝典指南:忻州东方家园家居广场运营规划方案(二)(最新精品).doc
- SQL Server2005数据库实用教程 教学课件 ppt 作者 常军林 ppt 第三章.ppt
- 传输综合网管管线管理系统资源录入规范化要求201105版.doc
- 北京新城城中村考察及改造实施机制探讨.pdf.pdf
最近下载
- DELIXI德力西仪表JKL5CV JKL2CV智能无功功率自动补偿控制器使用说明书 物料号:A0463099500.pdf
- 道路亮化工程项目可行性研究报告.docx
- 幼儿园必备《师德师风培训》-2024鲜版.ppt
- 新北师大版四年级数学上册《认识更大的数》练习题.pdf
- 【西南大学】[机考][0087]《计算机网络》 (3)辅导资料.doc VIP
- 四川327省考行测真题及解析.doc
- (冀教版)八年级生物下册全教案.pdf VIP
- 广东省汕头市2022-2023学年高一下学期期末考试历史试题(解析版).docx
- 专题 事件类记叙文(记叙文阅读)(原卷版).doc VIP
- 颜料红177的制备工艺分析-analysis of preparation technology of pigment red 177.docx
文档评论(0)