-第十章-中药制剂分析中新方法与新.ppt

§1 现代色谱技术 顶空气相色谱法 应用实例 静态顶空GC(内标法)测定血液中乙醇含量 对照品溶液的制备 将10g/l的乙醇储备液稀释10倍，精密吸取此 液1ml置于10ml顶空样品瓶中，同时精密加1ml内标溶液（0.25% 的正丙醇水溶液），迅速密封，即得。 样品制备 精密吸取1ml充分混匀的血样转移至10ml顶空样品瓶中， 同时精密加1ml内标溶液（0.25%的正丙醇水溶液），迅速密封， 即得。 色谱条件 （略） 顶空分析条件 平衡温度为50℃，平衡时间为10分钟（快速搅拌下）， 阀、输送管及定量管温度为80℃，加压为13.8kPa，加压时间、充 样时间和压力平衡时间均为0.15分钟，定量管为1.0ml。 * bjhk §1 现代色谱技术 超高效液相色谱（UPLC，Ultra Performance Liquid Chromatography） 主要特点 固定相 双（三乙氧基硅）乙烷在硅胶中形成桥式乙基基团 颗粒粒度小，仅为1.7μm 耐压，颗粒度分布范围很窄 装柱 检测器 响应快 样品池—10mm的光程（与普通HPLC相同）而体积只有500nL（普通HPLC的20分之一） 优点 更高的分析速度，更好分离效果和更高的灵敏度，速度、灵敏度及分离度，分别是HPLC的9倍、 1.7倍及3倍 * bjhk §1 现代色谱技术 超临界流体色谱（SFC, supercritical fluid chromatography） 以超临界流体（低黏度、高密度以及较高的扩散系数）作为流动相。 对GC及HPLC的检测器均可兼容使用 适用于分析GC难以处理的高沸点、不挥发性样品 分离速度较HPLC，分离效果更好。 应用实例 超临界流体色谱法测定怀牛膝制剂中齐墩果酸的含量 * bjhk §1 现代色谱技术 色谱联用技术 多维色谱 如：二维薄层色谱等 气相色谱-质谱联用技术 气相色谱-红外光谱联用技术 液相色谱-质谱联用技术 * bjhk §2 高效毛细管电泳(HPCE,high performance capillary electrophoresis) 电泳: 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象。 由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。 1937年 Tiselius (瑞典) 利用自由溶液电泳将人血清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β、γ球蛋白 1981年 Jorgenson 和 Luckas 发展了高效毛细管电泳分离分析技术 (使用75μm内径石英毛细管和采用了高达数千伏的电压)， * bjhk §2 高效毛细管电泳 各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为： ν+ =ν电渗流 + ν+ef 阳离子运动方向与电渗流一致 ν- =ν电渗流 - ν-ef 阴离子运动方向与电渗流相反 ν0 =ν电渗流 中性粒子运动方向与电渗流一致 可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离 分离原理 电场作用下，毛细管柱中出现：电泳现象和电渗流现象。 * bjhk §2 高效毛细管电泳 仪器装置 电压：0～30KV。 分离柱不涂敷任何固定液， 紫外或激光诱导荧光检测器 可检测到：10-19～10-21mol/L * bjhk §2 高效毛细管电泳 主要特点 优点 高分辨率：理论塔板数高达数百万块，甚至数千万块。 高灵敏度：可检测出低至10-21mol/L浓度的物质。 高分析速度：可在3分钟内分离30种阴离子；1.7分钟分离19种阳离子;4分钟可分离10种蛋白质. 试样用量少：仅需几nL（10-9L）的试样 仪器简单，操作成本低：分析一个试样仅需几毫升流动液 * bjhk §2 高效毛细管电泳 常见的毛细管电泳模式 毛细管区带电泳(CZE) 毛细管胶束电动色谱(MECC) （胶束作为假固定相的电动色谱） 毛细管凝胶电泳(CGE) （凝胶作为支持物，起分子筛的作用） 毛细管等电聚焦电泳(CIEF) （用于蛋白质、多肽等两性物质的分离） 毛细管等速电泳(CITP) * bjhk §2 高效毛细管电泳 应用 离子分析 药物分析 手性化合物分析 氨基酸分析 核酸分析及DNA测序 HPCE在中药制剂分析中的应用 生物碱的测定、动物类药材的鉴别、指纹图谱 * bjhk 高效毛细管电泳法测定心舒口服液中腺苷、芦丁和阿魏酸的含量 对照品溶液 （略） 供试品溶液的配制　取心舒口服液10 mL，加热浓缩至约1 mL，加60 %甲醇定容10 mL，冰箱放置过夜，经0. 45 mm滤膜滤过备用。 电泳条件　以熔融石英毛细管( 50 mm ×66 . 5 cm，有效分离