复方树莓提取液中SOD活性测定与其体内影响的实验-研究.pdf

引言 引言 树莓(Raspberry)，义称覆篙子，俗称野草莓，为多年生落叶小灌小类其果 实为聚合浆果[1]。近年来，树莓的种植在国内逐步兴起，各地均有一定种植面 积，但是对其的研究主要集中在食品或饮料加工方面[25]。树莓浆果柔嫩多汁， 含有包括各种氨基酸、维生素等多种营养物质及还有鞣化酸、SOD、黄酮、花青 素等具有特定生物学功效的营养成分[6]。树莓的这些营养成分不仅赋予树莓独 特的风味，也与其对食用者健康的保护作用密切相关。研究表明，树莓果汁具有 抑制癌细胞、延缓衰老等功效[7，8]。其作为功能食品具有极大的丌发应用价值。 既往研究表明，生物体内氧自由基生成增多是组织各种损伤发生的主要机制 之一。正常情况下，生物体内存在的氧自由基主要是活性氧反应产物。许多物理、 化学、生物因素都可诱发产生大量的自由基，自由基以各种方式造成组织急性或 慢性损伤[9]。所以，了解自由基的平衡状态，对于预防疾病，治疗疾病都有非 常重。由于自由基的高度化学活泼性，它极易与相邻的物质发生电子的得、失交 换，而且病理情况下自由基生成的数量大大增加，超出了机体的调控、保护能力， 继而攻击核酸、蛋白质、脂质等生物大分子，造成组织细胞的损伤。超氧化物歧 布于全身各组织中，它们的功能都是与超氧阴离子反应形成过氧化氢，再由过氧 化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶转变成水，从而使自由基清除，保护细胞免受损害。 由于超氧阴离子常是活性氧生成过程中的初始产物，因此，SOD也被看作为活性 氧防御的第一线，其活性的高低反映了机体抗氧化能力的强弱。临床标本验证结 果表明，消化系统疾病、肾脏疾病、呼吸系统疾病、烧伤整形、脑血管疾病、心 血管疾病患者的血清SOD活性水平低于健康对照绢。血清SOD是氧自由基清除酶， 反应机体内自由基总量，自由基应激状况是否失衡，与自由基代谢状态呈负相关 [11]。MDA是脂质过氧化反应的代谢产物，其含量的高低问接反映了绀纱5中氧A 由基含帚的变化，以及细胞受自由基攻击后脂质过氧化的程』蔓。 本研究首先分析了复方树莓提取液中SOD的活力，继而通过动物实验，进一 步验证J7咳复力”树莓提取液灌胃后，对小鼠体内SOD含量的影响，为域人限度丌 发利刚树莓的药剧保健价值提供实验依据。 青岛火：学硕I．学位论文 第一部分 复方树莓提取液中SOD活力测定 deDi SOD又称超氧化物歧化酶(Superoxismutase)，是重要的氧自由基清除 剂。山于人体衰老及许多疾病与机体内过量氧自由基，尤其是超氧阴离子有关， 因此积极地补充SOD有助于减少或阻断脂质过氧化反应，延缓机体衰老。已经证 实SOD口服有效，SOD作为食品添加剂，主要应用在两个方面：一是可作为罐头、 果汁等的抗氧剂以及水果、蔬菜的保鲜剂；二是作为食品营养强化剂。SOD作为 纯天然添加剂已在国内外得到广泛应用。 1．1测定原理 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺 形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见分光光度计测其吸光度。 当被测样品中含SOD时，SOD对超氧阴离子自由基有专一的抑制作用，使形成的 亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算 可求出被测样品中的SOD活力。 1．2主要仪器与试剂 1．2．1主要仪器 UV一3000紫外分光光度计：上海美谱达仪器有限公司。 DF～101S集热式恒温加热磁力搅拌器：郑州长城科工贸有限公司。 DG一800旋涡混合器：北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司。 1．2．2主要试剂 SOD试剂盒：南京建成生物工程研究所。 分析纯级冰乙酸：南京化学试剂有限公司。 1．3方法与步骤 1．3．1试齐J盒的配!占。 ． 试剂一：贮嵛液：5川1×】瓶(天冷或放冰箱会有部分结晶析出，需热水浴 溶解后冉用)。 试剂 』茈川液的7呢制：川1时每瓶5『¨1妒备液加双蒸水稀释至51)m1，4℃ 第一部分复方树莓提取液中S01)活力测定 保存1年。 试剂二：液体5ml×1瓶，4、10℃保存1年。 试剂三：液体5ml