苯甘氨酸氨基转移酶基因hpgt的原核优化表达与酶动力学特性研究.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，３２（５）：５１５７ 苯甘氨酸氨基转移酶基因ｈｐｇｔ的原核优化 表达与酶动力学特性研究 王宗瑞　赵广荣 （天津大学化工学院制药工程系　天津　３０００７２） 摘要　苯甘氨酸氨基转移酶（４Ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌｇｌｙｃｉｎｅａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）是假单胞菌所产生的一种能 够合成Ｄ苯甘氨酸的重要转氨酶。利用密码子优化技术，合成苯甘氨酸转移酶基因。构建原核重 组质粒ｐＣＤＦｈｐｇｔ，转入感受态细胞Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３），优化表达ＨｉｓＨｐｇＴ蛋白。利用ＮｉＮＴＡ柱 纯化技术获得高纯度的ＨｉｓＨｐｇＴ融合蛋白。分别测定融合蛋白在正反向反应中的酶活力单位及 最佳的反应温度、ｐＨ值及其他动力学参数，并对该酶特性作相关的机理分析。测定结果表明，正向 反应和反向反应的酶比活力分别为７４９ｍＵ／ｍｇ、２２５７ｍＵ／ｍｇ，此酶分解苯甘氨酸的能力要强于合成 苯甘氨酸；正向反应的最适温度与ｐＨ分别是３５℃和８．０；由米氏方程