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点杂交剖析小鼠CRBN基因组织表达 　　摘要：为研究ＣＲＢＮ（Ｃｅｒｅｂｌｏｎ）基因与常染色体隐性遗传非综合征轻型精神发育迟缓（Ａｕｔｏｓｏｍａｌ ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ ｎｏｎｓｙｎｄｒｏｍｉｃ ｍｅｎｔａｌ ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ，ＡＲＮＳＭＲ）的关系，探讨了小鼠ＣＲＢＮ基因ｍＲＮＡ在不同组织中的表达分布，应用点杂交（Ｄｏｔ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）和反转录聚合酶链式反应（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ－Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ， ＲＴ－ＰＣＲ）技术，分析了小鼠ＣＲＢＮ基因在肺、肝、心脏、肾和大脑中的表达情况。结果表明，小鼠ＣＲＢＮ基因ｍＲＮＡ在肺、大脑中的表达量较高，在心脏中的表达量最低。说明小鼠ＣＲＢＮ基因可广泛地表达于不同的器官组织中，除了学习、记忆功能外，可能还有其他功能存在。 　　关键词：ＣＲＢＮ基因；斑点杂交；反转录聚合酶链式反应 　　中图分类号：Ｑ７８６；Ｑ５０３文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）04－0857-03 　　 　　ｍＲＮＡ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ＣＲＢＮ Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｍｏｕｓｅ Ｔｉｓｓｕｅｓ 　　 　　ＴＡＮＧ Ｗｅｎ－ｈｕｉ，ＺＨＯＵ Ｒｏｎｇ，ＣＨＥＮ Ｐｅｉ－ｌｉｎ 　　（Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｎａｎｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎａｎｔｏｎｇ ２２６００７， Ｊｉａｎｇｓｕ， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ ＣＲＢＮ（Ｃｅｒｅｂｌｏｎ） ｇｅｎｅ ｗｉｔｈ ａｕｔｏｓｏｍａｌ ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ ｎｏｎｓｙｎｄｒｏｍｉｃ ｍｅｎｔａｌ ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ （ＡＲＮＳＭＲ）， ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ＣＲＢＮ ｇｅｎｅ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｕｓｅ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｄｏｔ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ａｎｄ ＲＴ－ＰＣＲ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＣＲＢＮ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｔ ａｎ ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｔｈｅ ｌｕｎｇ ａｎｄ ｂｒａｉｎ， ｂｕｔ ａｔ ａｎ ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ ｌｏｗ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｔｈｅ ｈｅａｒｔ． Ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ＣＲＢＮ ｇｅｎｅ ｉｓ ｗｉｄｅｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ． Ｉｔ ｍａｙ ｐｌａｙ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｖａｒｉｏｕｓ ｔｉｓｓｕｅｓ ｂｅｓｉｄｅｓ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＣＲＢＮ gene； dｏｔ ｂｌｏｔｔｉｎｇ； ＲT-PCR 　　 　　人类ＣＲＢＮ（Ｃｅｒｅｂｌｏｎ）基因是第一个被发现的常染色体隐性遗传非综合征轻型精神发育迟缓（Ａｕｔｏｓｏｍａｌ ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ ｎｏｎｓｙｎｄｒｏｍｉｃ ｍｅｎｔａｌ ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ，ＡＲＮＳＭＲ）致病基因［１］，它还可能和一些显性精神发育迟缓相关，但它的功能研究几乎是空白。小鼠ＣＲＢＮ基因由１１个外显子组成，编码４４５个氨基酸，ＣＲＢＮ蛋白含有１个２３７个氨基酸的Ｎ端ＡＴＰ依赖的ＬＯＮ蛋白酶结构域、１个调节Ｇ蛋白信号（ＲＧＳ）样的结构域、１个亮氨酸拉链基序和４个假想的蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）磷酸化位点［２］。ＣＲＢＮ蛋白在哺乳动物氨基酸序列中有高度的相似度，小鼠与人类ＣＲＢＮ蛋白有９６％的氨基酸相似度［３］。因此，研究小鼠的ＣＲＢＮ基因将有助于了解人类ＣＲＢＮ基因的功能。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　试验所用ＩＣＲ小鼠由南通大学实验动物中心提供；ＴＲＩｚｏｌ、ＤＬ２０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ为Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司产品；Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ Ｍ－ＭＬＶ、ＴａｑＴＭ ＰＣＲ试剂盒为ＴａＫａＲａ公司产品；ＤＩＧ ＤＮＡ标记试剂盒Ⅰ、ＤＩＧ杂交检测试剂盒Ⅱ由深圳依诺金生物公司提供；３Ｓ ＰＣＲ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ Ｖ３．１试剂盒为申能博彩公司产品；尼龙膜为Ｒｏｃｈｅ公司生产。其余试剂均为进口分装或国产分析纯；引物由上海英骏生物公司合成。 　　１．２方法 　　１．２．１总ＲＮＡ提取小鼠各组织总ＲＮＡ提取采用ＴＲＩｚｏｌ方法（详见试剂操作说明书），紫外分光光度计测定总ＲＮＡ浓度。 　　１．２．２ＣＲＢＮ探针的制备合成ＣＲＢＮ探针引物，上游引物为５′－ＴＡＧＴＧＡＡＡＧＴＧＡＡＡＧＣＡＡＴＴＧ－３′，下游引物为