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细胞毒活疫苗（灭活疫苗）生产工艺课件 豪威生物科技有限公司 主讲人 乔云龙 细胞苗工艺流程图 种毒 细胞 1、原代细胞：牛睾丸细胞、鸡成纤维细胞、羊睾丸细胞 传代细胞：wero非洲绿猴肾细胞、MDCK狗肾、DF-1鸡胚成纤维细胞、BHK-21幼仓鼠肾细胞、ST猪睾丸细胞、PK-15猪肾上皮细胞、Marc145猴肾细胞。 三、细胞培养液主要成分 氨基酸 氨基酸是组成蛋白质的基本单位.不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸.其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡.因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺.但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内.已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺. 碳水化合物 碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分.主要有葡萄糖，核糖，脱氧核糖，丙酮酸钠和醋酸等. 无机盐 培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡.此外，通过提供钠，钾和钙离子，帮助细胞调节细胞膜功能.培养液的渗透压是一个非常重要的因素，细胞通常可耐受260mOsm/kg 320 mOsm/kg.标准培养液的渗透压在此范围内波动.特别注意：向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压，特别是溶于强酸或强碱中的物质. 缓冲系统 大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4.但是，细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同.成纤维细胞喜欢较高pH （7.4 - 7.7），而传代转化细胞系则需要偏酸pH （7.0 - 7.4）.由于多数培养液靠碳酸氢钠（NaHCO3）与CO2体系进行缓冲，因此，气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡.如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在5%，培养3液中NaHCO3的加入量为1.97g/L；如果CO2浓度维持在10%，培养液中NaHCO3的加入 量为3.95g/L.细胞培养瓶盖不应拧得太紧，以保证气体交换. HEPES 是一种非离子缓冲液，在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵，在高浓度时对一些细胞可能有毒.HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠（0.34g/L）共用，以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加.在这种培养条件下，细胞培养瓶的盖子应拧紧，以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中.大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂，酸性培养液呈橙黄色，碱性培养液呈深红色. 磷酸缓冲液 磷酸盐缓冲液是磷酸二氢钠和磷酸氢二钠组成，其中磷酸二氢钠酸性较强。如果血液中的ph值过高的话，多余的碱就会与酸磷酸二氢钠结合生成磷酸氢二钠，反之，过酸时就会与磷酸氢二钠反应产生磷酸二氢钠，确保ph值就会稳定在一定的范围内。 维生素 在细胞培养中，尽管血清是维生素重要来源，但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长. DMEM DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分 序号 化合物名称 含量 (mg/L) 序号 化合物名称 含量 (mg/L) 1 无水氯化钙 .2H 2 O 265.00 18 L-丝氨酸 42.00 2 硝酸铁 .9H 2 O 0.10 19 L-苏氨酸 95.00 3 氯化钾 400.00 20 L- HYPERLINK /doc/5733695.html \t _blank 色氨酸 16.00 4 无水硫酸镁 97.67 21 L- HYPERLINK /doc/4855731.html \t _blank 酪氨酸 72.00 5 氯化钠 6400.00 22 L-缬氨酸 94.00 6 无水磷酸二氢钠 109.00 23 D- HYPERLINK /doc/4938372.html \t _blank 泛酸钙 4.00 7 HYPERLINK /doc/5567985.html \t _blank 丁二酸 75.00 24 酒石酸胆碱 7.20 8 丁二酸钠 100.00 25 叶酸 4.00 9 L-盐酸精氨酸 84.00 26 肌醇 7.20 10 L-盐酸 HYPERLINK /doc/6047466.html \t _blank 胱氨酸 63.00 27 HYPERLINK /doc/5808871.html \t _blank 烟酰胺 4.00 11 甘氨酸 30.00 28 核黄素 0.40 12 L-盐酸组氨酸 42.00 29 盐酸硫胺 4.00 13 L-异 HYPERLINK /doc/5572362.html \t _blank 亮氨酸 105.00 30 盐酸吡哆辛 4.00 14 L-亮氨酸 105