《食用菌组织分离制母种》-精选课件.ppt

实训三 组织分离制母种 实训第一大部分 讲解及演示 指导老师　　王德芝 食用菌味道鲜美 风味独特 下面请同学们欣赏几道 美味的菜肴 菇香美味迎客来 花好月圆蘑菇香 香菇招来蝶恋花 金针系珠相思豆 团团圆圆蘑菇圈 龙凤呈祥猴头宴 银耳黑耳齐争艳 蘑菇全席大师宴 味道鲜美君品尝 食用菌保健酒及饮料系列 食用及药用菌的药用提取物 实训内容 母种培养基的配制 及组织分离接种 （一）实训目的 1.掌握母种培养基的配制操作及高压灭菌方法; 2.理解组织分离法制母种的原理; 3.掌握组织分离接种技术; 4.会使用超净工作台和培养箱. （二）实训原理 组织分离法是利用子实体组织来分离获得纯菌丝的方法。 组织分离系一种无性繁殖法，双亲的染色体没有经过重组，因此组织分离基本上可保持亲本的生物学特性，优良菌株用组织分离法能使遗传特性稳定下来。 该法操作简便，取材广泛，菌丝生长发育快，比较常用。 实训设计思路 1. 母种培养基的成分不同对菌丝生长有什么影响； 2. 组织分离选用的材料及分离的部位不同有什么影响； 3.培养温度不同有什么影响； 4.杂菌污染的原因 （三）实训器材 新鲜菇(耳)体、刀片、镊子或接种针 试管斜面培养基 接种箱或超净工作台、无菌室、酒精灯、75%酒精及酒精棉球等 培养箱等。 复习上一节母种培养基的配制步骤 1.按配方称量：见下面的配方 2.煮制 3.分装 4.灭菌 5.排斜面 培养基的高压灭菌 使用高压蒸汽灭菌锅应注意的事项？ （提问同学） (1)锅内装物品不应过紧； (2)注意排出冷气，否则不能保证灭菌效果； (3)加热排冷气后，使温度达到121.3℃，压力在0.1－0.15 MPa之间维持30 min； (4)不耐高热高压之物品，不能用此法灭菌。 （四）组织分离操作的主要步骤：  ①挑选种菇：挑选生长健壮，菌龄适中，无病虫害，具有本品种优良性状的菇体或组织作为种菇。 ②环境、用具严格消毒：即超净工作台或无菌室的使用，形成无菌的环境。 超净工作台的使用 超净台可将空气通过由特制的微孔的“超级滤清器”后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓“高效的特殊空气”，它除去了大于0.3μm的尘埃、真菌和细菌孢子等等。 工作人员就在这样的无菌条件下操作，保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。 超净工作台 ⑴ 使用注意事项（提问同学） ① 提前接通电源，开启紫外线杀菌灯，30 分钟后关闭杀菌灯； ②然后开启日光灯、风机，20分钟后方可进行操作。 组 织 分 离 操 作 ③菇体消毒：将子实体菌柄基部切除，置接种箱内，在无菌箱内以0.1％的升汞水浸几分钟，再用无菌水冲洗并揩干，或用75％酒精棉球擦拭菌盖与菌柄2次，进行表面消毒。 组织分离部位的选择 菌肉组织如图 菌核组织如图 示 范 操 作 ④ 组织分离：解剖刀经火焰灭菌，在菇柄中部纵切一刀，用手掰开菌再用刀片在菇盖与菇柄交界处切取黄豆大小的小方块。 ⑤ 接种：在无菌条件下，随后挑取一组织小块，迅速移接到PDA斜面培养基上，并塞好棉塞。? 示 范 操 作 ⑥ 贴标签培养：试管从接种箱取出之前，应逐支试管正面的上方贴上标签，写明菌种编号、接种日期，随后把试管放入培养箱（室）中，置适宜温度（平菇22℃，香菇25℃）下培养，待组织块长出菌丝无污染即为纯种。 培 养 置于适宜温度下培养3-5天，就可以看到组织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种。如香菇、平菇、双孢菇、草菇、猴头菌等多采用此方法。 数显式恒温培养箱的使用 培养箱是通过对周围环境条件的控制制造出一个能使细胞、组织更好地生长的环境，条件控制的结果就会形成一个稳定的条件 ①调节适宜温度，并使温度稳定，再放培养物; ②培养过程中要观察温度稳定性和生长状态，并注意培养时间； 注 意 ③培养终止，关掉电源，取出培养物； ④培养箱的环境应清洁整齐，干燥通风；保持培养箱内空气干净，并定期消毒； 实训第二大部分 学 生 分 组 操 作 分 组 操 作 每班同学可分为二大组6小组； 第一大组3台双人超净工作台，每次可6人操作； 第二大组可在无菌室内操作； 第一大组采用菌盖与菌柄交界处组织进行分离，第二大组采用菌盖带菌褶部分进行组织分离，作对比观察。 分 组 辅 导 注意同学们的操作； 及时纠正不规范动作。 接种操作完毕，收集试管进行培养。 数显式恒温培养箱的使用 注意事项（提问同学） 实训第三大部分 结果观察 母种培养生长状态观察 母种培养生长状态可分4种情况. 1.菌丝已萌发，生长旺，无污染 (如图所示)； 2.菌丝已萌发，但有杂菌污染； 3.菌丝未萌发，无污染； 4.菌丝未萌发，且杂菌污染严重； 原因分析 1.菌丝