感染以λ噬菌体粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子.PPT

基因工程与基因体外表达 Genetic Engineering and gene expression in vitro 工具酶 限制性核酸内切酶 DNA聚合酶Ⅰ 逆转录酶 T4DNA连接酶 碱性磷酸酶 末端转移酶 Taq DNA聚合酶 第二节基因克隆需要特定的载体 能自主复制； 具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定； 有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点； 分子量小，以容纳较大的外源DNA。 第三节 基因克隆的过程 化学合成法 要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列 。 基因组DNA文库(genomic DNA library) cDNA文库(cDNA library) 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR) 第四节 真核细胞基因转染 磷酸钙共沉淀法 电穿孔法 DEAE-葡聚糖法 脂质体法 显微注射法 三、PCR技术适合进行基因的定点诱变 5` 5` 3` 3` 5` 5` 3` 3` a b c d 5` 3` 3` 5` 变性、退火 5` 5` 3` 3` 加klenow DNA聚合酶 5` 3` 5` 3` 加入引物a、d 5` 3` 5` 3` 3` 5` 3` 利用基因定点诱变可改变基因工程蛋白的特性 　　 自然界的蛋白质常具有一定的可塑性，当某种蛋白