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罗红霉素生产工艺剖析 　　[摘 要]目的 建立罗红霉素干混悬剂微生物限度检查法与验证。方法 薄膜过滤法，用含5%乙醇的0.1%蛋白胨溶液500ml分5次冲洗滤膜。结果 各控制菌回收率均在70%以上。结论 该方法可行。 　　[关键词]罗红霉素生产工艺 　　中图分类号：S7 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）13-0346-01 　　罗红霉素干混悬剂为半合成的14元环大环内脂类抗生素，适用于化脓性链球菌引起的咽炎及扁桃体炎，敏感菌所致的鼻窦炙、中耳炎、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作，肺炎支原体或肺炎衣原体所致的肺炎，沙眼衣原体引起的尿道炎和宫颈炎，敏感细菌引起的皮肤软组织感染。本实验采用薄膜过滤法，用含5%乙醇的0.1%无菌蛋白胨溶液冲洗滤膜，对该品种进行微生物限度检查，各控制菌回收率在70%以上，表明该方法可行。 　　1 仪器与试药？？ 　　1.1 仪器：HTY-2000集菌仪、集菌培养器（孔径为0.45μm），HH.BII.420电热恒温培养箱、LRH-250A生化培养箱、Sartorius BS 2002S电子天平、SA-1480-Ⅱ净化工作台。 　　1.2 培养基：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、营养肉汤培养基、MUG培养基，均购于中检所。 　　1.3 菌种：枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、大肠埃希菌CMCC（B）44102、白色念珠菌CMCC（F）98001、黑曲霉CMCC（F）98003（以上菌株均为第三代），均购于中检所。 　　1.4 菌液制备 　　1.4.1 取经30℃～35℃培养18～24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤培养液1ml，加0.9%无菌氯化钠至每ml含菌50～100cfu。 　　1.4.2 取经23℃～28℃培养24～48小时的白色念珠菌改良马丁培养液1ml，加0.9%无菌氯化钠至每ml含菌50～100cfu。 　　1.4.3 取经23℃～28℃？培养5～7天的黑曲霉改良马丁营养琼脂斜面，用0.9%无菌氯化钠3～5ml将孢子洗脱，加0.9%无菌氯化钠至每ml含菌50～100cfu 　　2 实验方法 　　2.1 细菌霉菌及酵母菌检查方法的验证 　　2.1.1 供试液的制备 取供试品10g，加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100g，作为1：10的供试液。 　　2.1.2 方法验证过程 验证试验进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌的回收率。 　　2.1.2.1 实验组 取1：10供试液1ml，加入50ml含5%乙醇的0.1%无菌蛋白胨溶液中，摇匀，立刻过滤，滤膜用500ml含5%乙醇的0.1%无菌蛋白胨溶液冲洗后，用注射器加入菌液1ml，滤干，取滤膜培养。每株菌株（大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉）各做1份试验。 　　2.1.2.2 菌液组 取菌液1ml加入平皿中，立刻加入相应的琼脂，各菌株做2份平行试验。 　　2.1.2.3 供试品对照组 按试验组的方法不加菌液，测定供试品的本底菌数。 　　2.1.2.4 稀释剂对照组 取上述菌液（枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉）各1ml，？加入50ml含5%乙醇的0.1%无菌蛋白胨溶液中，滤过，滤膜用500ml含5%乙醇的0.1%无菌蛋白胨溶液分5次冲洗后，滤干。取滤膜培养。每株菌株（大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉）各做1份试验。 　　2.1.3 计算公式 　　实验组的菌回收率=（实验组平均菌落数―供试品对照组平均菌落数）/菌液组的平均菌落数 　　稀释剂对照组的菌回收率=稀释剂对照组平均菌落数/菌液组的平均菌落数 　　2.1.4 评价标准 细菌、霉菌及酵母菌回收率试验采用先制成1：10供试液，再用薄膜过滤法检查，试验组的回收在70%以上，表明可用上述方法检查细菌、霉菌及酵母菌。 　　2.1.5 结果 　　经过培养和计数，控制菌（大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌以及黑曲霉）的回收率。 　　实验数据可以看出，实验组各控制菌的的回收率均高于70%，稀释既对照组的回收率也高于70%，说明用含5%乙醇的0.1%蛋白胨溶液500ml分5次冲洗滤膜的这种方法可行。 　　2.2 控制菌（大肠埃希菌）方法验证过程 　　2.2.1 供试液的制备 方法同2.1.2 　　2.2.2 方法验证过程 　　2.2.2.1 试验组 取1：10供试液10ml，加入500ml含5%乙醇的0.1%无菌蛋白胨溶液中，摇匀，立刻过滤，滤膜用500ml含5%乙醇的0.1%无菌蛋白胨溶液分5次冲洗后，用注射器加入大肠埃希菌菌液