羌活不同地理种群ITS序列变异及系统发生剖析.docVIP

羌活不同地理种群ITS序列变异及系统发生剖析 　　[摘要]利用核糖体rRNA基因内转录间隔区（ITS）序列，对我国羌活31个野生群体的遗传结构进行了分析。经PCR扩增测序，获得长度为634～635 bp的ITS核苷酸序列，其平均G+C量（578%）显著高于A+T量。在羌活31个居群402条序列中共检测到31个变异位点，多态位点比例为488%，其中，简约信息位点为12个，共有31种单倍型。AMOVA分析结果显示：羌活大部分的遗传变异发生在居群间（57%）。以宽叶羌活为外群构建的NJ树显示：31个单倍型并没有按地理分布形成明显的族群，各地理单元中的单倍型相互混杂，没有明显的地理分化模式。 　　[关键词]羌活；ITS；序列分析；遗传结构 　　[Abstract]In this study， 31 Notopterygium incisum populations were analyzed using ITS sequences to investigate the genetic structure.The results showed that： the ITS region ranged in size from 634 to 635 bp and base composition was with high G+C content of 578% Thirtyone polymorphic sites were detected from 402 sequences of 31 populations of N incisum， and the proportion of polymorphic sites was 488%， in which parsimony informative sites were up to 12 And 31 haplotypes were identified based on these polymorphic sites Molecular variance analysis （AMOVA） indicated that high genetic differentiation （57%） existed among population， and gene flow was low （Nm=038） among populations Phylogenetic relationships of 31 haplotypes were analyzed using NJ method with N forbesii as an outgroup Phylogenetic analysis showed that 31 haplotypes from different populations mixed together and did not form distinct geographically separated clades 　　[Key words]Notopterygium incisum； ITS； sequence analysis； genetic structure 　　羌活 Notopterygium incisum Ting ex H T Chang 是我国特有的羌活属的多年生草本植物[12]，与同属的宽叶羌活N forbesii Boiss同为药材羌活的基原植物，以根茎及根入药[3]，主要分布在四川、青海、甘肃等省的高寒山区[4]。羌活是中、藏、羌医药体系中常用药材，主要含挥发油和香豆素类成分。具散寒祛风、除湿止痛之功效，用于风寒感冒头痛、风湿麻痹、肩背酸痛[5]等症。现代药理研究表明对心脑血管疾病也有确切疗效[6]。目前，用羌活的中 （藏）成药有200余种，用药需求量非常大。近年来的掠夺性采挖和生境破坏，致使各个道地产区资源受到严重威胁，由于长期依赖采挖，野生资源及其生境破坏严重，传统道地产区资源已近枯竭，1987年即被国务院《中国野生药材资源保护管理条例》列为Ⅲ级保护物种，2005年又载入《中国物种红色名录》[7]。因此，急需对其遗传特性及分布格局进行深入系统的研究，以便制定羌活资源的保护策略。目前，羌活植物化学[8]、药理[5]、地理分布[4，9]、分类学[12]、环境土壤学[10]和驯化栽培[1112]等方面的研究比较多， 但从DNA 分子水平上对羌活群体遗传结构、遗传分化及多样性等方面的研究较少，仅见唐学芳等[13]用RAPD标记研究了四川西部4个居群33株羌活的遗传分化，但由于其样品数量有限还不能反映羌活群体遗传状况全貌，需要更多的分子生物学标记研究结果给予补充。 　　高等植物中的rRNA 基因（rDNA）是高度重复的串联序列单位，每个