实时荧光定量PCR检测绵羊肉制品中鸡源性成分.PDFVIP

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０１６（１０上）：２８６－２８８，３００ 实时荧光定量ＰＣＲ检测绵羊肉制品中 鸡源性成分 １ １ ２ １ 李建平 ，李世新 ，高　静 ，赵　鲁 （１．菏泽食品药品检验检测中心，山东 菏泽２７４０００；２．菏泽市畜牧工作站， 山东 菏泽２７４０００） 中图分类号：Ｓ８７９．２ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００４－７０３４（２０１６）１０－０２８６－０４ 　　肉制品掺假已成为全球食品行业的一个突出问 ＲｏｔｏｒｇｅｎｅＱ），均由德国 ＱＩＡＧＥＮ公司生产；梯度 题，不仅会引起个体的健康风险，包括疾病感染、代谢 ＰＣＲ仪（型号为Ｔ１００），Ｂｉｏ－Ｒａｄ生产；微量核酸蛋 紊乱、过敏反应等，而且肉制品的掺假更易引起经济、 白分析仪（型号为ＳＭＡ１０００），北京美林恒通科技有 ［１］ 宗教、道德的问题 。对相关部门而言，建立快速有 限公司生产。 效的方法鉴定物种并对其进行监管十分必要。 ２　方法 以聚合酶链式反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ， ２．１　ＤＮＡ的提取及浓度、纯度的测定 ＰＣＲ）技术为基础的种属检测技术已是食品中肉类成 ＣＴＡＢ法提取肉类 ＤＮＡ：取样品置于２ｍＬ离心 分鉴别的主流技术［２－３］，且荧光定量 ＰＣＲ技术的迅 管中，加入ＣＴＡＢ、蛋白酶Ｋ，使用ＴｉｓｓｕｅｌｙｓｅｒＬＴ进行 速发展又将种属和外源基因鉴定技术提高到了新层 组织破碎（３０Ｈｚ，２ｍｉｎ），６５℃水浴３０ｍｉｎ，不时振 ［４－６］ ［７］ 次 。李楠等 研究了牛、羊生肉制品中鸭、鸡、猪 荡混匀；加入５００ Ｌ氯仿－异戊醇（２４∶１）混合液强 μ 源性成分的荧光 ＰＣＲ检测方法和使用 ＰＣＲ扩增和 烈振荡；１２０００ｒ／ｍｉｎ离心 １５ｍｉｎ，吸取上清液加入 电泳检测的流程对肉制品中的鸡源性成分进行检测 等体积异丙醇，强烈振荡后 １２０００ｒ／ｍｉｎ离心 的行业标准方法，然而具体的针对绵羊源性成分和鸡 １０ｍｉｎ，弃上清液；用７５％乙醇洗涤２～３次，加ＴＥ 源性成分检测方面，应用荧光定量 ＰＣＲ技术并依托 溶解 ＤＮＡ （ＴＥ量视 ＤＮＡ沉淀多少而定，５０～ 全自动技术建立的快速、灵敏、准确地检测食品中绵 １１０ Ｌ）。用微量核酸蛋白分析仪（型号为ＳＭＡ１０００） μ 羊和鸡源性成分的定性、定量检测方法未见有报道。 检测其纯度及浓度。 试验结合相关研究和用于肉制品中鸡和羊源性 ２．２　引物和探针序列 成分鉴定的ＴａｑＭａｎ荧光定量ＰＣＲ引物与探针，建立 所有引物和探针在上海生工生物工程技术服务 了绵羊和鸡源性成分鉴定的荧光ＰＣＲ方法，以期为 有限公司合成，引物和探针序列见表１。 肉制品质量控制提供一种有效的途径。 １　材料 表１　试验所用的引物和探针 １．１　试验动物 扩增长 项目 碱基序列