黄芪注射液对缺氧缺糖复氧复糖大鼠海马神经元c.PDFVIP

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１１Ｊａｎ；２７（１）：８５～９０ ·８５· 黄芪注射液对缺氧缺糖／复氧复糖大鼠 海马神经元ｃａｓｐａｓｅ３表达的作用 闫凤霞，高维娟，钱　涛，叶冬青，任立群，张雅丽，侯志平 （承德医学院病理生理学教研室，河北承德　０６７０００） 中国图书分类号：Ｒ３３２；Ｒ２８２．７１０．５；Ｒ３２２．８１；Ｒ３２９．２５； 凋亡；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶３；作用机制 Ｒ７４３．３１０．２２；Ｒ８４５．２２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１１）０１－００８５－０６ 　　脑血管病是临床常见病、多发病，是目前三大致 摘要：目的　观察黄芪注射液对缺氧缺糖／复氧复糖大鼠海 死疾病之一是首位致残因素，且其发病率、病死率及 马神经元凋亡相关基因ｃａｓｐａｓｅ３表达的影响。方法　取原 致残率有逐年上升的趋势，其中缺血性脑血管病占 代培养８ｄ的大鼠海马神经元，随机分为４组：正常对照组、 绝大部分。黄芪是中医药治疗缺血性脑血管病的常 缺氧缺糖／复氧复糖组、黄芪注射液溶剂对照组和黄芪注射 用药物，具有清除自由基、减轻脑水肿、对抗炎症介 液组。除正常对照组外均进行缺氧缺糖０５ｈ，再复氧复糖。 各组于复氧复糖后０、０５、２、６、２４、４８、７２ｈ和１２０ｈ采用免 质、缓解钙离子超载、改善神经元能量代谢、降低兴 ［１］ 疫组织化学染色法和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测 ｃａｓｐａｓｅ３蛋白的表 奋性氨基酸毒性等作用 。本课题组前期试验证 达，采用原位杂交检测海马神经元ｃａｓｐａｓｅ３ｍＲＮＡ的表达。 实，黄芪注射液可减轻全脑缺血／再灌注损伤引起的 结果　免疫组化结果显示：与正常对照组相比，除０ｈ和０５ 大鼠海马神经元的凋亡，并可降低离体培养的大鼠 ｈ之外，缺氧缺糖／复氧复糖组各时间点海马ｃａｓｐａｓｅ３阳性 ［２］ 海马神经元缺氧缺糖／复氧复糖后所致的凋亡 ， 神经元数目占神经元总数的百分率均明显增多（Ｐ＜００５）， ［３］ 抑制凋亡相关基因ＪＮＫ３ ，通过抑制ＪＮＫ３信号通 于２４ｈ达到高峰。黄芪注射液溶剂对照组以上指标的变化 ［４］ 路而减少 ｃａｓｐａｓｅ３的表达 。本研究通过对原代 趋势与缺氧缺糖／复氧复糖组相一致。黄芪注射液组除０ｈ 培养的大鼠海马神经元施加缺氧缺糖／复氧复糖因 和０５ｈ之外，各时间点以上指标均比缺氧缺糖／复氧复糖 素，模拟脑缺血／再灌注损伤过程，观察黄芪注射液 组减少（Ｐ＜００５）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测结果显示：除０ｈ和 对缺氧缺糖／复氧复糖大鼠海马神经元半胱氨酸天 ０５ｈ外，各时间点缺氧缺糖／复氧复糖组海马神经元 ｃａｓｐａｓｅ３蛋白的平均灰度值均较正常对照组明显增加（Ｐ＜ 冬氨酸蛋白酶３（ｃｙｓｔｅｉｎｙｌａｓｐａｒｔａｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅａｓｅ， ００５），２４ｈ最高；与缺氧缺糖／复氧复糖组相比，黄芪注射液 ｃａｓｐａｓｅ３）表达的影响，探讨黄芪注射液抑制缺氧缺 溶剂对照组各时间点ｃａｓｐａｓｅ３蛋白的平均灰度值无变化（Ｐ 糖／复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的分子机制。 ＞００５），而黄芪注射液组除０ｈ和０５ｈ外，在各个时间点 １　材料 ｃａ