不同浓度载HSVTK基因微泡对HIFU治疗后VX第三军医大学学报.DOC

不同浓度载HSV1-TK基因微泡对HIFU治疗后裸鼠肝癌的影响 李红阳 周世骥 龚建平 刘长安 李生伟 谭晶 丁雄 刘作金 重庆医科大学附属二院肝胆外科 摘要：目的 研究高强度聚焦超声治疗裸鼠肝癌后，观察不同浓度载HSV1-TK基因超声脂质微泡对裸鼠残留肝癌组织中TK基因表达的影响。方法 建立裸鼠肝癌模型40只，随即分成四组，每组10只，使用JC200型HIFU治疗仪对裸鼠肝癌肝癌消融80%后，经裸鼠尾静脉注入不同浓度载基因微泡。A组：浓度0.2ug/ul的携基因微泡；B组：浓度为0.4ug/ul的携基因微泡；C组：浓度为0.6ug/ul的携基因微泡；D组：浓度为0.8ug/ul的携基因微泡，然后用超声辐照，48h后活杀一批荷瘤裸鼠行Real-time PCR 检测TK mRNA表达情况，免疫组化及Western-blot检测TK蛋白的表达情况，48h后经肌肉注射前药GCV0.2ml（100 mg·kg-1·d-1），使用二维超声监测肿瘤大小，每7天测量一次，连续测量6周，绘制抑瘤曲线。结果 当携基因微泡浓度≤0.6ug/ul时，TK mRNA、蛋白的表达与微泡呈浓度依赖，而当携基因微泡浓度0.6ug/ul时，基因的表达与微泡浓度无相关性，故携基因的微泡浓度为0.6ug/ul时TK基因表达最强，所需的基因量最少，抑瘤率在A组、B组、C组、D组中分别是0%，18.10±3.70%，34.2±3.65%，35.86±4.2%；与A组相比，B、C、D组中的抑瘤率逐渐增强(P0.05)，而C、D组比较抑瘤率无统计学意义(P0.05) 结论 当携基因微泡浓度≤0.6ug/ul时，TK mRNA、蛋白的表达、抑瘤率与微泡呈浓度依赖，而当携基因微泡浓度0.6ug/ul时，基因的表达及抑瘤率与微泡浓度无相关性，故携基因微泡浓度为0.6ug/ul时TK基因表达最强，抑瘤率最强。为后续研究提供了可靠的实验基础。 Effect of microbubbles encapsulating HSV-TK gene in Nude mice hepatocellular carcinoma tissue after treatment of HIFU Li Hong-yang, Zhou Shi-ji, Liu Chang-an, Li Sheng-wei, Gong Jian-ping, Ding Xiong, Liu Zuo-jin, 基金项目：国家自然科学基金 基金项目：国家自然科学基金面上项目（No及重庆市卫生局科研项目(2008-2-192) 作者单位：400010 重庆市，重庆医科大学附属二院肝胆外科 第一作者：李红阳 电话 E-mail： HYPERLINK mailto:1564356100@ 1564356100@ 通讯作者：刘作金 Hepatobiliary Surgery, the Second Affiliated Hospital, Chongqing University Chongqing 400010 ABSTRACT：Objective To observe the effect of different concentrations of lipid bubbles loaded HSV1-TK gene expression in Nude mice hepatocellular carcinoma tissue after treatment of HIFU. Methods 40 Nude mice hepatocellular carcinoma after HIFU were randomized into 4 groups as follows: A:The concentration of microbubbles loaded gene was 0.2ug/ul；Group B：The concentration of microbubbles loaded gene was 0.4ug/ul；Group C：The concentration of microbubbles loaded gene was 0.6ug/ul；Group D：The concentration of microbubbles loaded gene was 0.8ug/ul mg/ml. Different concentrations of lipid bubbles loaded HSV1-TK gene was injected via in Nude mice tail vein, ultrasound was used at 1MHz，2 W/cm2，irr