南方水稻黑条矮缩病毒P6抗体的制备及应用.PDFVIP

中国农学通报 2014,30(28):270-274 Chinese Agricultural Science Bulletin 南方水稻黑条矮缩病毒P6抗体的制备及应用 郑胜兰，贾东升，魏太云 （福建省植物病毒学重点实验室/福建农林大学植物病毒研究所，福州350002） 摘 要：为了建立快速准确检测田间介体白背飞虱带毒率的方法，利用Gateway 重组技术将与病毒早期 复制有关的P6基因的N 端993 bp 构建原核表达载体pDEST 17-P6 ，并将诱导表达的目的蛋白免疫注射 新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果表明：Western blot 检测制备的P6 抗体可特异性检测SRBSDV 侵 染水稻的P6 蛋白，免疫荧光标记技术可检测南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black streaked dwarf virus ，SRBSDV)侵染白背飞虱体内的P6 蛋白，且P6 抗体可直观高效准确地用于免疫荧光标记检测昆虫 带毒率。以上研究表明，所制备的P6 抗体可用于SRBSDV 的田间介体昆虫带毒率快速检测，有助于病 毒病害的监测和预报。 关键词：南方水稻黑条矮缩病毒；P6 蛋白；抗体制备；免疫荧光标记 中图分类号：S432.1 文献标志码：A 论文编号：2014-0775 PreparationandApplicationofPolyclonalAntibodiesAgainstP6Protein ofSouthernRiceBlackStreakedDwarfVirus ZhengShenglan,JiaDongsheng,WeiTaiyun (InstituteofPlantVirology,FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou350002) Abstract:Toestablishamethod that allowingfastandefficientdetectionofSRBSDV,afragmentcomprising the N-terminal 993 bp of P6 ORF of SRBSDV was cloned into the vector pDEST17 using Gateway recombinationtechnology.Antiserumwasobtainedbyinjectingthebacteriallyexpressedpeptidetohealthy rabbits.WesternblotexperimentsshowedthattheantiserumcoulddetectP6specificallyinriceplantsinfected bySRBSDV.ThefluorescenceantibodycouldalsobeusedtodetectP6 inWBPHsusingimmunofluorescent labelingtechnique.TheseresultsindicatedthatP6 antibodiespreparedherecouldbeusedforefficientand accuratedetectionofSRBSDVindiseasedriceplantsandviruliferousvectorsbyimmunofluorescentlabeling techniques,whichwasimportantforthemonitoringandforecastingofSRBSDVoccurrence. Key words: southern rice black streaked dwarf virus (SRBSDV); P6 protein; antibody preparation; immunofluorescentlabeling 0 引言 虱(So