《家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin-2的克隆、序列分析及表达及表达》-毕业论文设计.docVIP

苏州大学本科生毕业设计（论文） - PAGE 16 - 苏州大学本科生毕业设计（论文） 目 录 TOC \o 1-3 \h \z \u HYPERLINK \l _Toc262811203 摘要 1 HYPERLINK \l _Toc262811204 前言 PAGEREF _Toc262811204 \h 3 HYPERLINK \l _Toc262811205 1 材料和方法 PAGEREF _Toc262811205 \h 4 HYPERLINK \l _Toc262811206 1.1 材料及主要试剂 PAGEREF _Toc262811206 \h 4 HYPERLINK \l _Toc262811207 1.2 方法 4 HYPERLINK \l _Toc262811208 1.2.1 引物设计 4 HYPERLINK \l _Toc262811209 1.2.2 PCR扩增目的片段 4 HYPERLINK \l _Toc262811210 1.2.3 目的片段的分离和回收（Takara回收试剂盒） PAGEREF _Toc262811210 \h 5 HYPERLINK \l _Toc262811211 1.2.4 酶切反应 5 HYPERLINK \l _Toc262811212 1.2.5 连接反应 PAGEREF _Toc262811212 \h 6 HYPERLINK \l _Toc262811213 1.2.6 感受态细胞制备 PAGEREF _Toc262811213 \h 6 HYPERLINK \l _Toc262811214 1.2.7 连接产物的转化 PAGEREF _Toc262811214 \h 6 HYPERLINK \l _Toc262811215 1.2.8 试剂盒抽提质粒DNA 6 HYPERLINK \l _Toc262811216 1.2.9 重组质粒的鉴定及测序 6 HYPERLINK \l _Toc262811217 1.2.10 原核表达 PAGEREF _Toc262811217 \h 7 HYPERLINK \l _Toc262811218 1.2.11 SDS蛋白电泳 PAGEREF _Toc262811218 \h 8 HYPERLINK \l _Toc262811220 2 结果 PAGEREF _Toc262811220 \h 9 HYPERLINK \l _Toc262811221 2.1 野桑蚕Serpin-2基因的cDNA序列克隆 PAGEREF _Toc262811221 \h 9 HYPERLINK \l _Toc262811222 2.2 野桑蚕Serpin-2基因的cDNA序列分析 PAGEREF _Toc262811222 \h 10 HYPERLINK \l _Toc262811223 2.3 Serpin-2重组表达载体酶切鉴定 PAGEREF _Toc262811223 \h 14 HYPERLINK \l _Toc262811224 2.4 蛋白质表达与SDS分析 PAGEREF _Toc262811224 \h 15 HYPERLINK \l _Toc262811225 2.5 Western Bloting分析 PAGEREF _Toc262811225 \h 15 HYPERLINK \l _Toc262811226 3 讨论 PAGEREF _Toc262811226 \h 16 HYPERLINK \l _Toc262811227 参考文献： PAGEREF _Toc262811227 \h 17 HYPERLINK \l _Toc262811228 致 谢 PAGEREF _Toc262811228 \h 18 HYPERLINK \l _Toc262811229 附录1. 19 HYPERLINK \l _Toc262811230 附录2. 20 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin-2的克隆、序列分析及表达及表达 摘 要 本研究以家蚕中大造品种为材料，以其 cDNA为模板克隆家桑蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin-2基因；采用大肠杆菌原核表达系统（BL21）进行家蚕Serpin-2基因的表达研究。主要结果如下： 根据已知野蚕Serpin-2（GenBank登录号：AF242200.1）序列设计合适的引物，采用PCR方法克隆了家蚕Serpin-2基因。序列分析表明，家蚕Serpin-2基因编码区长度为990bp，编码329个氨基酸，相对分子量约为43.75 kDa，等电点约为4.67。与家蚕Serpin-2比较发