沉默Matriptase对胰腺癌细胞株SW1990及移植瘤生长影响-内科学(消化系病)专业论文.docx

沉默 Matriptase 对胰腺癌细胞株 SW1990 及移植瘤生长的影响 中文摘要 第一部分 沉默 Matriptase 对胰腺癌细胞株 SW1990 生长的影响 目的：探讨沉默 Matriptase 对胰腺癌株 SW1990 体外生长的影响，并探讨其对胰 腺癌细胞株 SW1990 可能的作用机制。 方法：根据 Genbank 中 Matriptase 的编码区基因序列 NM_021978.3 及相关参考文 献，合成特异性针对 Matriptase 的 siRNA 及与 Matriptase 无关的阴性对照 siRNA，瞬 时转染胰腺癌细胞株 SW1990；实验分为 4 组：阴性对照组（A 组）、12.5 nM（B 组） 、 25 nM (C 组）、50 nM Matriptase-siRNA 组（D 组）；利用 real time PCR 技术测定转染 后 24h 各组细胞中 Matriptase 在 mRNA 水平上的相对表达量；Western blot 技术检测 转染后 24 h 各组细胞 Matriptase 在蛋白水平的相对表达量；明胶酶谱检测各组细胞在 转染 24 h 后 Matriptase 酶活性及 MMP-9 表达量的变化，CCK-8 检测各组细胞在转染 24 h 后细胞增殖能力的变化；划痕实验检测各组细胞在转染 24 h 后细胞迁移力的变 化；Transwell 侵袭实验检测各组细胞在转染 24 h 后细胞侵袭力的变化。Western blot 检测各组细胞在转染 24 h 后 uPA/pro-uPA、HGF、AKT、p-AKT、E-cadherin 表达量 的变化。 结果：（1）胰腺癌细胞株 SW1990、AsPC-1 中都有 Matriptase 的高表达，SW1990、 AsPC-1 的蛋白表达量分别为（0.94±0.63）、（1.58±0.15）；胰腺癌细胞株 PaTU8988 中 无 Matriptase 的表达。（2）胰腺癌细胞株 SW1990 在转染 NC、12.5 nM、25 nM、50 nM Matriptase-siRNA 24 h 后，各组 Matriptase mRNA 水平分别为 1、0.44±0.05、0.28±0.04、 0.25±0.07；但 Matriptase 蛋白表达水平分别是 0.74±0.06 、0.49±0.04、0.34±0.01、 0.24±0.05。（3）Matriptase-siRNA 转染前后细胞增殖力的变化，各组的 24 h 的吸光度 分别为 0.62±0.01、0.62±0.03、0.37±0.05、0.33±0.05；48 h 的吸光度分别为 0.77±0.05、 0.69±0.03、0.48±0.02、0.42±0.05（4）A 组及 C 组划痕间距分别为 0.061±0.013 、 I 中文摘要 沉默 Matriptase 对胰腺癌细胞株 SW1990 及移植瘤生长的影响 0.368±0.014，可见 C 组细胞的迁移距离明显降低；而 A 组和 C 组穿膜细胞数分别是 （416±1.3）与（109±2.8），可见转染胰腺癌细胞株 SW1990 Matriptase-siRNA 后细胞的 侵袭力明显降低。(5)Matriptase-siRNA 转染前后 Matriptase 蛋白酶活性及 MMP-9 的变 化，A、B、C、D 各处理组的 Matriptase 酶活性分别 1.50±0.16、1.21±0.27、0.64±0.16、 0.62±0.03；MMP-9 的活性分别为 0.93±0.26、0.48±0.36、0.35±0.11、0.35±0.12。其中 C 组与 D 组的 Matriptase 酶活性及 MMP-9 活性明显降低（6）经转染处理后 A、B、C、 D 组的 uPA/pro-uPA 的比值分别为 3.52±0.04、1.11±0.11、0.15±0.06、0.12±0.08； p-AKT 各组的蛋白表达量分别为 0.91±0.16、0.37±0.20、0.27±0.17、0.09±0.06；AKT 蛋白相对表达量分别为 1.13±0.05、1.01±0.11、1.22±0.19、1.03±0.37；E-cadherin 蛋白 相 对 表 达 量 分 别 为 1.20±0.09 、 0.87±0.92 、 0.85±0.08 、 0.63±0.26 ；结果示 转染 Matriptase-siRNA 后 uPA/pro-uPA 比值降低，p-AKT 表达量减少，AKT 及 E-cadherin 表达量无明显变化。 结论：沉默 Matri