法舒地尔对血管紧张素Ⅱ诱导足细胞骨架重构的干预作用-内科学(肾病)专业论文.docx

目录 英文缩略表 1 HYPERLINK \l _bookmark0 中文摘要 2 HYPERLINK \l _bookmark1 英文摘要 4 HYPERLINK \l _bookmark2 前言 5 HYPERLINK \l _bookmark3 材 料 7 HYPERLINK \l _bookmark4 方法 10 HYPERLINK \l _bookmark5 结果 16 讨论 错误!未定义书签。 HYPERLINK \l _bookmark6 结论 26 HYPERLINK \l _bookmark7 参考文献 27 HYPERLINK \l _bookmark8 致谢 30 HYPERLINK \l _bookmark9 综述 31 HYPERLINK \l _bookmark11 参考文献 37 英文缩略表 英文缩写 英文全称 中文译名 MYPT1 phosphorylation myosin phosphatase targets 1 磷酸化肌 球蛋白磷 酸酯酶 靶点亚单位 1 AngⅡ angiotensinⅡ 血管紧张素Ⅱ ROCK Rho Kinase Rho 激酶 RT-PCR reverse transcription polymerase chain reaction  反转录—聚合酶链反应 WB western blot 蛋白免疫印迹杂交 NS nephrotic syndrome 肾病综合征 ESRD end-stage renal disease 终末期肾病 IFN-γ interferon-γ 干扰素-γ HE hemotoxylin and eosin staining 苏木素伊红染色 GBM glomerular basement membrane HYPERLINK /view/679348.htm 肾小球基底膜 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 1 法舒地尔对血管紧张素 II 诱导足细胞骨架重构的干预作用 中文摘要 目的 观察 ROCK 抑制剂法舒地尔对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)诱导 小鼠足细胞骨架重构的影响，并进一步探讨法舒地尔在血管紧张素Ⅱ诱导足细胞 骨架重构病变中的保护机制。 方法 免疫细胞化学染色鉴定SV40T转染的条件永生型小鼠足细胞株。将不同浓 度(10-9-10-6 mol/L)AngⅡ处理足细胞24h、10-7mol/L AngⅡ以不同时间(6-36h) 作用足细胞，观察足细胞Synaptopodin表达的变化。本实验体外采用10-7mol/L Ang Ⅱ作用足细胞24h致骨架重构的损伤模型。实验分为3组：对照组、AngⅡ刺激组、 法舒地尔干预组。对照组：用RPMI1640培养液培养足细胞；AngⅡ刺激组：采 用10-7mol/L AngⅡ干预足细胞24h；法舒地尔干预组：10-6mol/L mol/L法舒地尔预 孵育不同时间和不同浓度 (10-8-10-6 mol/L) 法舒地尔预孵育30 min后，再加入含 10-7 mol/L AngⅡ的培养基，继续孵育24h。FITC-鬼笔环肽荧光染色分析足细胞 骨 架 相 关蛋 白 F-actin结 构 分 布变 化 ； Western Blot 检测 足 细 胞骨 架 相 关蛋 白 Synaptopodin表达变化。进一步观察细胞内调节骨架装配的Rho/ROCK信号通路 的活性，即采用Western Blot检测Rho激酶I(ROCKI)及磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶 点亚单位1(MYPT1)表达，代表ROCK的表达及活性。 结果 AngⅡ以剂量依赖和时间依赖方式下调足细胞骨架相关蛋白Synaptopodin 的表达。AngⅡ使足细胞骨架相关蛋白F-actin结构发生改变，F-actin由交联高度 有序地平行聚集成束贯穿于细胞全长，沿细胞呈极性分布解体以松散的网状结构 互相结合，足细胞失去原有的细胞张力。而法舒地尔预处理可减轻AngⅡ介导的 Synaptopodin的表达下调(P 0.05)，法舒地尔预处理可减轻F-actin的重构。法舒 地尔预处理可下调 AngⅡ诱导的足细胞Rho激酶I(ROCKI)蛋白表达(P 0.05)；法 舒地尔预处理也可下调 AngⅡ诱导的足细胞磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单 位1(p-MYPT1)蛋白表达(P 0.05)。 结论 法舒地尔可稳定足细胞的细胞骨架，拮抗 AngⅡ对足细胞骨架重构的损 伤。法舒地尔的上述保护作用可能与作用于足细胞内的细胞骨架肌动蛋白的