脆江蓠多糖的提取分离及抗肿瘤活性研究-海洋生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论 文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已 经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体， 均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由 本人承担。 作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查 阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进 行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校 可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布 本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规 定和程序处理。 作者签名： 导师签名： 日期：年 月 日 日期： 年 月 日 汕头大学硕士学位论文 汕头大学硕士学位论文 摘要 肿瘤是当今世界直接危及人类生命的一种最常见的疾病。传统放、化疗药物 不仅可杀死肿瘤细胞，对正常细胞的伤害也较大；因此，安全性高、毒性低的抗 肿瘤药物的研发已受到世界各国肿瘤研究的重视。具有免疫调节活性、抗肿瘤功 效的天然大分子多糖，对肿瘤的抑制效果好，毒副作用小；用于肿瘤的辅助治疗 安全性高，可行性强。 脆江蓠是一种新兴养殖海藻，目前已在广东南澳县人工养殖成功，可大面积 培养。然而与其应用的报道几乎处于空白，开展相关研究已迫在眉睫。因此，本 文以脆江蓠为实验材料，研究其多糖的提取、分离工艺条件及组成；在发现脆江 蓠多糖具有抗氧化活性的基础上，进一步研究其体内外抗肿瘤作用及作用机制， 以期为脆江蓠的开发利用提供理论依据。具体内容如下： 1）响应面法优化多糖提取工艺条件 通过单因素实验，确定响应面法优化分析的自变量因素，通过整个实验区域 内自变量的优化组合，得到脆江蓠多糖的最优提取工艺条件为：浸提温度 93.1℃、 料液比 1:60.1、超声作用时间 35.8min。在此条件下，脆江蓠多糖（GLP）提取 得率为 16.75%。 2）多糖的分离纯化和组成分析 先后采用 DEAE C-52 和 Sephadex G-100 柱层析对多糖粗提物进行分离纯化。 得到三个多糖级分，分别为 GLP-1、GLP-2，GLP-3，经化学分析和红外光谱等 分析表明脆江蓠多糖由 D-半乳糖和 3,6-内醚半乳糖（3,6-AG）组成，为具有 α- 糖苷键的硫酸多糖。 3）多糖自由基清除能力测定 测定了多糖对自由基的清除活性，结果表明：脆江蓠多糖具有较强的自由基 清除能力，对·OH 和 DPPH·自由基的清除率分别高达 59.15%和 33.78%，表现出 较强的抗氧化活力。 4）体外抗肿瘤实验 I 采用 MTT 法考察脆江蓠多糖对体外培养的 EC-109、MCF-7、HepG-2、HeLa 细胞增殖的影响，并初步探讨其肿瘤抑制机制。得到实验结果为：脆江蓠多糖浓 度为 1000μg/mL 时，对 HeLa、HepG-2、MCF-7、EC-109 细胞的抑制率分别达 到 49.11%，41.18%，34.98%，31.33%，并呈现一定量效关系。观察抑制率最高 的 Hela 细胞的形态变化，结合 Annexin V-FITC/PI 双荧光染色，发现：剂量浓度 范围内，随着 GLP 给药剂量的增加，凋亡晚期/坏死的细胞数量不断增多，而未 经处理的阴性对照仅有少量细胞凋亡；表明 GLP 通过诱导 Hela 细胞凋亡而抑制 其增殖。 5）体内抗肿瘤实验 以 S180 小鼠为实验模型，5-氟尿嘧啶作阳性药物，考察脆江蓠多糖对 S180 肉瘤生长的抑制活性，同时通过测定荷瘤小鼠免疫系统各项生化指标，探讨 GLP 的抗肿瘤机制。结果表明模型小鼠胸腺和脾脏指数显著下降，免疫器官受损，而 阳性药物在抑制肿瘤生长的同时对免疫器官也有较大程度的损害，毒副作用较大； 脆江蓠多糖对 S180 荷瘤小鼠具有较强的抑瘤活性，当腹腔注射剂量为 100mg/kg bw d-1 时，对 S180 肉瘤的抑制率达到 34.75%，高于中剂量灌胃组（200mg/kg bw d-1）的肿瘤抑制率（31.35%）。同时，给予脆江蓠多糖的荷瘤小鼠免疫器官指数 显著增大（P＜0.01），并激活了淋巴细胞的增殖分化，血清 IL-2 水平、IFN-γ 水 平极显著上升（P＜0.01），IL-10 水平极显著下降（P＜0.01），对机体免疫系统 表现出较好的保护作用。对荷瘤小鼠肿瘤组织病理形态学观察，可见随着脆江蓠 多糖给药剂量的增加，肿瘤组织坏死程度加重，肿瘤细胞核溶解，细胞融合，结 构不清。结果显示，脆江蓠多糖具有较强的抗肿瘤活性，且毒副作用小，其抗肿 瘤作用与机体免疫增强作用有关。 综上，脆江蓠多糖潜在着抗肿瘤活性，在癌症