5氮杂2’脱氧胞苷对人膀胱癌细胞系T24细胞DBCCR1基因启动子的去甲基化作用研究.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 目 录 HYPERLINK \l _bookmark0 摘 要 1 HYPERLINK \l _bookmark1 Abstract 3 HYPERLINK \l _bookmark2 第一章 前 言 5 HYPERLINK \l _bookmark3 第二章 实验材料、方法和步骤8 HYPERLINK \l _bookmark4 1. 材料8 HYPERLINK \l _bookmark5 2. 主要试剂及仪器 8 HYPERLINK \l _bookmark6 3. 膀胱癌细胞的复苏、培养、传代及冻存 11 HYPERLINK \l _bookmark7 4. 人膀胱癌 T24 细胞 DBCCR1 基因启动子甲基化状况检测 13 HYPERLINK \l _bookmark8 5. 不同浓度 5-Aza-CdR 处理后膀胱癌 T24 细胞 DBCCR1 基因 HYPERLINK \l _bookmark8 mRNA 的检测 19 HYPERLINK \l _bookmark9 6. MTS 比色法检测 5-Aza-CdR 对人膀胱癌细胞株 T24 细胞的生长 HYPERLINK \l _bookmark9 抑制情况 25 HYPERLINK \l _bookmark10 7. 流式细胞仪（FITC Annexin Ⅴ/PI 双染法）检测细胞凋亡 25 HYPERLINK \l _bookmark11 8. 统计学方法分析 26 HYPERLINK \l _bookmark12 第三章 实验结果 27 HYPERLINK \l _bookmark13 1. 5-Aza-CdR 对膀胱癌 T24 细胞 DBCCR1 基因启动子甲基化状态的 HYPERLINK \l _bookmark13 影响 27 HYPERLINK \l _bookmark14 2. 5-Aza-CdR 对膀胱癌 T24 细胞 DBCCR1 基因 mRNA 表达的影响 HYPERLINK \l _bookmark14 27 HYPERLINK \l _bookmark15 3. 不同浓度 5-Aza-CdR 对人膀胱癌细胞株 T24 细胞增殖的影响 .32 HYPERLINK \l _bookmark16 4. 不同浓度 5-Aza-CdR 对人膀胱癌细胞株 T24 细胞凋亡的影响 .33 HYPERLINK \l _bookmark17 第四章 讨 论 36 HYPERLINK \l _bookmark18 第五章 结 论 40 HYPERLINK \l _bookmark19 参考文献41 HYPERLINK \l _bookmark20 综述 46 HYPERLINK \l _bookmark21 论文中的中英文缩略词 53 PAGE PAGE 1 摘 要 目的：探讨 DNA 甲基转移酶抑制剂 5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人膀胱癌 细胞株 T24 中 DBCCR1 基因启动子甲基化状态的影响；探讨 5-Aza-CdR 对人膀胱 癌细胞株 T24 中 DBCCR1mRNA 表达水平的影响；探讨 5-Aza-CdR 对人膀胱癌 T24 细胞增殖、凋亡的影响。 方法：1、T24 细胞培养以及药物处理：体外培养人膀胱癌细胞株 T24，传代后， 分别用含不同浓度的（0、1、4、16、64umol/l）甲基转移酶抑制剂 5-Aza-CdR 的 RPIM1640 培养液进行培养 48 小时。2、应用甲基化特异性 PCR（MSP）检测 5-Aza-CdR 处理前后 T24 细胞中 DBCCR1 基因的甲基化状况。3、PCR 法检测在 不同浓度（0、1、4、16、64umol/l）5-Aza-CdR 处理膀胱癌 T24 细胞 48 小时后 T24 细胞 DBCCR1mRNA 的表达情况；4、MTS 比色法检测经不同浓度（1、4、 16、64umol/l）5-Aza-CdR 处理 48 小时后人膀胱癌细胞株 T24 的生长抑制作用；5、 应用流式细胞仪检测不同浓度（1、4、16、64umol/l）的 5-Aza-CdR 在处理 T24 细胞 48h 后的凋亡变化情况。 结果：1、MSP 法检测膀胱癌细胞 DBCCR1 基因启动子甲基化结果：对照组即正 常条件下培养的 T24 细胞完全甲基化，经 16umol/l 的甲基转移酶抑制剂 5-Aza-CdR 处理 48h 后，T24 细胞的甲基化扩增条带为阴性，而未甲基化扩增条带为阳性。这 表明膀胱癌细胞株 T24 中 DBCCR1 基因启动子存在高甲基化，而 5-Aza-CdR 可逆 转 DBCCR1