5LOX siRNA抑制肝癌细胞HepG2裸鼠瘤生长和可能机制.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 英文缩略词对照表 Abbreviation 英文缩写 英文全称 中文全称 AA Arachidonic acid 花生四烯酸 Dicer dsRNA-specific endonuclease 双链 RNA 核酸内切酶 DMEM Dulbecco’s modified Eagle’s Medium DMEM 培养液 dsRNA double～stranded RNA 双链 RNA EB ethidium bromide 溴化乙锭 EDTA Ethylene diaminete tracetic acid 乙二胺四乙酸二钠 ERK Extracellular Signal-Regulated Kinase 细胞外信号调节激酶 HBV Hepatitis B virus 乙型肝炎病毒 HCC Hepatocellular carcinoma 肝细胞癌 HCV hepatitis C virus 丙型肝炎病毒 LOX lipoxygenase 脂氧合酶 MAPK mitogen activated protein kinase 丝裂原蛋白激酶 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PLC primary liver cancer 原发性肝癌 PTGS posttranscriptional gene silencing 转录后基因沉默 RdRPs siRNA-ribonucleoprotein complex RNA 依赖性 RNA 多聚酶 RISC RNA inducing silencing complex RNA 诱导的沉默复合物 RT-PCR Reverse Transcriptase-PCR 逆转录-聚合酶链反应 shRNAs short hairpin RNAs 发夹状 RNA siRNA small interfering RNAs 小干扰 RNA siRNP siRNA-ribonucleoprotein complex siRNA-核蛋白复合物 5-LOX siRNA 抑制肝癌细胞 HepG2 裸鼠瘤生长和可能 机制 硕士生：盛华嵩 导 师：熊奇如 教授 （安徽医科大学第一附属医院肝胆外科） 中文摘要 目的 通过 iRNA 干扰技术设计 5-LOX(5-脂氧合酶,5-lipoxygenase)siRNA，检测被 转染的人肝癌细胞株 HepG2 中 5-LOX 表达的变化。研究 5-LOX siRNA 对裸鼠移 植瘤生长的抑制作用和对通路蛋白 ERK1/2 的影响，进一步探讨体内 5-LOX 基因 表达受抑对肿瘤生长的抑制作用及其作用的机制，从而进一步拓宽肝癌的发病机 理，为肝肿瘤的基因学治疗提供依据和靶点。并探讨 RNAi 技术在肝肿瘤的研究和 防治中的价值。 方法 人工合成针对 5-LOX 的干扰 RNA，并在细胞水平上将 5-LOX siRNA 对人肝癌 细胞株 HepG2 进行转染实验。细胞实验分成三组：①阳性干扰组（转染 5-LOX siRNA 干扰质粒）②阴性对照组（转染空白载体质粒）③空白组（正常肝癌细胞 不作任何转染）。于瞬时转染 48h，收集细胞，做实时免疫荧光定量 PCR 检测。免 疫荧光定量 PCR 检测转染后的细胞 HepG2 中 5 –LOX 基因表达明显受抑，验证转 染效果确切后，再用上述三组细胞接种裸鼠皮下建立裸鼠移植瘤模型。实验裸鼠 也随机分三组：①转染组（接种阳性干扰组 HepG2 细胞）、②转染空载体组（接种 阴性对照组 HepG2 细胞）、③未转染组（接种空白组 HepG2 细胞）。接种 21 天后 处死裸鼠，取出瘤体，测量肿瘤最长的长径和与之垂直的短径，按下式计算肿瘤 体积（肿瘤体积（V）=长径×短径 2×0.5）和肿瘤衰退率=转染干预组平均肿瘤体积 比/未转染组平均肿瘤体积（V/Vo）。应用蛋白免疫印迹法 Western-blot 检测 5-LOX， ERK1/2 等通路蛋白水平的变化，逆转录聚合酶链反应 RT-PCR 检测 5-LOX，ERK1/2 的 mRNA 表达改变。 结果 ①在细胞转染水平上应用荧光定量 PCR 技术检测阳性干扰组 siRNA 转染人肝 癌 HepG2 细胞后 5-LOX 的表达量相对定量结果为 0.341，明显较阴性对照组相对定 量结果 0.822 和空白组相对定量结果 1.074 降低（P＜0.01）。②在动物实验组测量 转染组 裸鼠 肿 瘤 平 均 体 积 为 （ 10.660±4.552 ） cm3 与 转 染 空 载 体 组 平 均 体 积 （19.576±6.081）cm3 及未转染组平均体积（20.465±8.395）cm3 比较明显减小（P ＜0.01），转染组肿