5氮杂2’脱氧胞苷对子宫内膜癌细胞系 增殖及IGFBP7表达的影响.docx

摘 摘 要 精品参考文献资料 5-氮杂-2’脱氧胞苷对子宫内膜癌细胞系增殖及 IGFBP7 表达的影响 摘 要 背景与目的 子宫内膜癌（Endometrial cancer，EC）是全球范围内女性生殖系统最常见 的恶性肿瘤之一，其发病率仅次于子宫颈癌居于第二位，且呈逐年上升趋势。 在中国，仅 2012 年就有 62000 个新发病例，居于女性恶性肿瘤的第九位。但其 发病机制尚不清楚。胰岛素样生长因子结合蛋白 7（Insulin-like growth factor binging protein 7，IGFBP7）是分子量为 30-kDa 的一种分泌蛋白，研究发现，其 在前列腺癌、恶性黑色素瘤、结直肠癌、甲状腺癌等多种实体肿瘤中表达下降 或缺失，其异常表达与 CpG 岛高甲基化导致基因沉默相关，应用甲基转移酶抑 制剂 5-氮杂-2’脱氧胞苷（5-aza-2 deoxycytidine，5-Aza-dC，decitabine)处理后 其表达上调，并发挥抑癌功能。课题组前期研究结果显示，IGFBP7 在子宫内膜 癌细胞系中表达下降或缺失，通过脂质体转染法，使子宫内膜癌细胞系中 IGFBP7 的表达上调，结果发现子宫内膜癌细胞的增殖速率降低，凋亡率增加；另外， 向子宫内膜癌细胞培养基中加入人重组 IGFBP7，发现其能通过调控 MEK/ERK 信号通路，抑制子宫内膜癌细胞的增殖。本实验应用 5-氮杂-2’脱氧胞苷处理子 宫内膜癌 HEC-1A 及 Ishikawa 细胞，观察其对子宫内膜癌细胞的增殖及对 IGFBP7 表达的影响，探讨其治疗子宫内膜癌的可能性。 I 方法 （1）四种不同浓度 5-Aza-dC （2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L） 分别刺激子宫内膜癌HEC-1A及Ishikawa细胞24、48、72h。应用Cell Counting Kit-8 （ CCK-8 ）法检测不同浓度 5-Aza-dC 在 不同时间 点 对子宫内膜 HEC-1A 及 Ishikawa细胞增殖活性的影响，并计算其对两种肿瘤细胞的抑制率。 （2）应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测5μmol/L 5-Aza-dC处理72 小时前后HEC-1A及Ishikawa细胞中IGFBP7 mRNA的表达变化。 （3）应用免疫蛋白印迹（Western blot）法检测5μmol/L 5-Aza-dC处理72小 时前后HEC-1A及Ishikawa细胞中IGFBP7 蛋白的表达变化。 （4）应用统计软件SPSS17.0对实验数据进行统计学分析，定量资料以 x ??s 表示，符合正态分布的两组独立数据间比较采用t检验，符合正态分布的多组定 量资料采用单因素方差分析，多个样本均数间的两两比较采用LSD-t法，以?=0.05 为检验水准 结果 CCK-8 法检测不同浓度 5-Aza-dC 对子宫内膜癌 HEC-1A 及 Ishikawa 细胞增殖活性的影响 结果显示，四种不同浓度 5-Aza-dC （2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、 20μmol/L）作用24、48、72h均能抑制HEC-1A及Ishikawa细胞的增殖。相同的药 物浓度，随着作用时间的延长，细胞增殖率明显降低，抑制率增加，呈时间依 赖性，差异具有统计学意义（P0.05）；相同的作用时间，随着药物浓度的升高， 细胞增殖率明显降低，抑制率增加，呈剂量依赖性，差异具有统计学意义 （P0.05）。 5-Aza-dC 对子宫内膜癌细胞 HEC-1A 及 Ishikawa 中 IGFBP7 mRNA 表达的影响 结果显示，应用5μmol/L 5-Aza-dC处理HEC-1A细胞72小时后， IGFBP7 mRNA的相对表达量为19.81±0.80，与处理前相比较，mRNA的表达量明显上调， II 差异有统计学意义（P＜0.05）。5μmol/L 5-Aza-dC处理Ishikawa细胞72h后，其 IGFBP7mRNA的表达量为9.39±0.94，与处理前相比较，表达明显上调，差异具 有统计学意义（P＜0.05）。 5-Aza-dC 对子宫内膜癌细胞 HEC-1A 及 Ishikawa 中 IGFBP7 蛋白表 达的影响 结果显示，经5μmol/L 5-Aza-dC处理72小时后，HEC-1A细胞中IGFBP7 蛋 白的相对表达量为1.64±0.02，与处理前0.74±0.13相比，其表达水平明显升高， 差异有统计学意义（P＜0.05）。相同条件处理Ishikawa细胞后，IGFBP7蛋白的 相对表达量为0.92±0.15，与处理前0.57±0.01相比，其表达水平明显升高，差异 具有统计学意义（P＜0.05）。 结论 1. 5-